胎盘造血干细胞库构建的初步研究

发布时间：2020-07-31 15:44

【摘要】：造血干细胞治疗是目前最成熟的一门干细胞移植医疗技术,已经证明可以治疗多种血液性疾病,如白血病、血友病、血癌等。目前临床应用的造血干细胞主要来源于成年人的外周血、骨髓和婴儿出生后的脐带血,但是有许多原因限制了这些来源物的造血干细胞临床使用。因此寻找含量更充足的造血干细胞来源物成为目前造血干细胞临床使用急需解决的问题。近年来,研究发现胎盘中含有丰富的造血干细胞,其特征与脐带血中造血干细胞相同,可以作为临床使用的造血干细胞理想的新来源。本研究采用灌洗和酶消化相结合作用的方法从20份胎盘中分离出有核细胞及CD34~+造血干细胞,并拟构建胎盘造血干细胞库对分离出来的细胞进行长期低温保存。得到结果如下:1.通过灌洗收集得到的有核细胞平均数为(16.82±6.08)×10~8,而追加的酶消化还可以再分离出有核细胞平均数为(7.79±3.13)×10~8,占到本实验分离得到有核细胞平均总数的32%。说明了灌洗的方法并不能够有效分离出胎盘有核细胞,在灌洗的基础上追加酶消化来分离胎盘中剩余的有核细胞是必要的。2.从山东脐带血库2001年发布的文章可知,胎盘中收集得到的有核细胞和CD34~+造血干细胞的平均数分别为(24.65±6.50)×10~8和(22.60±7.29)×10~6,是脐带血中收集得到有核细胞和CD34~+造血干细胞的平均数至少2倍以上。对从胎盘中分离得到的造血干细胞进行体外培养时,胎盘来源的造血干细胞在体外培养中具有良好的集落形成能力,即具有良好的造血分化和增殖能力。结果说明了胎盘造血干细胞和脐带血造血干细胞一样符合临床使用的要求,完全符合构建造血干细胞库要求,为建立胎盘造血干细胞库提供了实验依据。3.对18份在拟构建的胎盘造血干细胞库经过长期超低温保存的胎盘有核细胞复苏后进行细胞活率检测和细胞增殖检测,发现冻存的胎盘有核细胞复苏后的活性基本都维持在80%以上,符合目前脐带血库对冻存后细胞活性的要求;而复苏后的胎盘有核细胞能够在有利于有核细胞生长的培养体系中增殖,说明复苏后的有核细胞并没有发生生物学特征改变。因此,本研究方法拟建立的胎盘造血干细胞库对胎盘有核细胞的长期保存是可行可靠的。综上所述,说明了胎盘中含有丰富的造血干细胞,从胎盘中分离得到的造血干细胞可以作为脐带血造血干细胞的可靠新来源,较好解决脐带血中临床应用的造血干细胞数量不足的问题,建立起类似于脐带血库的胎盘造血干细胞库具有极其重要的意义。最后本研究展望了胎盘造血干细胞库的建库要求及运行情况。
【学位授予单位】：华南理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R457.7;R318
【图文】：

胎儿,底蜕膜,血液,造血干细胞

.5.1 与脐带血造血干细胞具有相近性研究证实，来自胎儿后期胎盘－脐带血血液中的血细胞具有不同于出生后骨髓血中的造血干细胞及免疫活性细胞的生物学特性，它富含可重建长期造血系统的造血干细胞，具有高增生和长期骨髓重建的能力[36]。图 1-1 胎盘的结构Fig.1-1 The structure of placenta：胎盘的结构分为 3 层，分别是羊膜、叶状绒毛膜(也称丛密绒毛膜)和底蜕膜。羊膜和叶膜构成胎盘的胎儿部分，底蜕膜构成胎盘母体部分。胎盘内有母体和胎儿两套血循环，胎体血液之间并不直接接触，胎儿面血液循环过程是通过脐动脉到达胎盘绒毛小叶内的毛细，与母体血液进行物质交换后再回到脐静脉。

有核细胞,胎盘,比例

4.29 0.9 94.34.15 0.5 98.2有核细胞数量对比可以看出，20 份胎盘经过灌洗液冲洗后，追加酶消化的有核细胞，收集得到的胎盘灌洗有核细胞和胎盘酶消化.08）×108和（7.79±3.13）×108，其中 2 号胎盘样本酶消灌洗出来的有核细胞数量还多，而 8、9 和 18 号胎盘样近，其他大部分胎盘样本灌洗得到的有核细胞远多于酶次收集到的有核细胞的平均值作比例图，可得图 2-1 。

有核细胞,流式,细胞,检测结果

第二章胎盘有核细胞分离的研究2.4.2 两次收集到有核细胞活率对比本实验采用 7-AAD 流式方法对两次收集到的胎盘有核细胞进行细胞活率检测，其结果如图 2-2 所示。由表 2-3 和 2-4 可以看出，20 份胎盘样本利用酶消化得到有核细胞的细胞活率都大于利用灌洗方法得到有核细胞的活率，两者的细胞活率平均值分别为（96.5±1.96）%和（90.9±1.25）%。说明了用灌洗的方法对胎盘有核细胞进行分离时由于对细胞产生了物理力，对有核细胞造成了一定物理损害，而利用酶对胎盘进行消化分离时对细胞的物理作用相对温和，对胎盘有核细胞损害更小。

【参考文献】