耐碳青霉烯类大肠埃希菌的耐药机制及其同源性分析

发布时间：2020-08-09 18:58

【摘要】：目的:探讨临床分离的大肠埃希菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制及同源性。方法:收集2016年1月-2016年3月临床标本中分离的大肠埃希菌共计112株,Vitek 2-compact全自动微生物分析仪和常规方法进行细菌鉴定及药敏检测,初步筛选碳青霉烯类耐药大肠埃希菌6株;采用EDTA协同试验和改良Hodge试验检测碳青霉烯酶表型;运用PCR扩增碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaVIM、blaGES、blaIMP、blaNDM、blaGIM、bla OXA-23/48等)、及其他β-内酰胺酶基因(blaTEM、blaSHV、blaCTX-M)及及喹诺酮类药物耐药基因(qnrA、qnrB、qnrS)。对阳性产物进行测序以确定基因型别;通过质粒接合实验检测其耐药基因的转移特性;应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对耐碳青霉烯类大肠埃希菌进行同源性分析;应用多位点序列分析(MLST)确定其等位基因编号及基因序列型(ST型),并利用eBURST软件进行亲缘性分析。结果:共检测得6株碳青霉烯类耐药大肠埃希菌,耐药率为5.4%(6/112),其中3株碳青霉烯类耐药大肠埃希菌携带bla NDM,其中1株携带blaNDM-1,1株携带blaNDM-1和blaTEM-1,1株菌同时携带bla NDM-3、blaCTX-M-15及blaTEM-1基因。3株携带blaNDM基因大肠埃希菌经EDTA协同实验和改良Hodge实验均为阳性,基因型和表型一致。3株产blaNDM型大肠埃希菌均通过接合试验将bla NDM基因传递给了大肠埃希菌J53感受态菌,成功转移至受体菌,接合子对碳青霉烯类药物均为耐药,PCR扩增接合子并经测序确定blaNDM阳性,并使其获得了相似的耐药特性。另外3株未检测出碳青霉烯酶基因的大肠埃希菌中,1株仅携带blaCTX-M-65基因,1株仅携带blaTEM-1基因,另1株仅携带bla CTX-M-15基因。未检测到bla KPC、bla VIM、bla GES、bla IMP、bla GIM及bla OXA碳青霉烯类耐药基因阴性。6株碳青霉烯类耐药大肠埃希菌均未发现出qnrA、qnrB、qnrS等喹诺酮类药物耐药基因。3株携带blaNDM的大肠埃希菌MLST结果显示为3个不同ST型,分别为ST744、ST167和ST7219,eBURST软件分析示ST744和ST167属于CC10克隆群,ST7912属于CC131克隆群。这3株携带bla NDM的大肠埃希菌经PFGE成功分型为A、B、C三种不同的克隆型。结论:1、本研究所收集本地区耐碳青霉烯类大肠埃希菌均为多重耐(MDR)菌,对替加环素和阿米卡星均敏感,耐药现象严重,其中3株为产blaNDM型的大肠埃希菌,另外3株未检出碳青霉烯类耐药基因。2、首次在中国发现1株产blaNDM-3的大肠埃希菌,并且该菌株同时携带blaTEM-1和blaCTX-M-15基因。另2株产blaNDM型的大肠埃希菌中,1株仅携带blaNDM-1基因,1株同时携带blaNDM-1和bla TEM-1基因。3、通过MLST和PFGE的方法同时对3株产blaNDM型的大肠埃希菌进行遗传相关性分析发现,3株实验菌无克隆相关性。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R446.5
【图文】：

试验结果,碳青霉烯类,抗菌药物,大肠埃希菌

DC10、DC52改良Hodge试验结果阳性，DC9为阴性结果，S为阴性对照

菌株,大肠埃希菌,基因,碳青霉烯类

图 4 EDTA 协同试验 DC44 号菌株为阳性结果因的 PCR 检测及测序结果碳青霉烯类大肠埃希菌中检测出 blaNDM 基因 3 株（见株为 blaNDM-1，其中 1 株同时携带 blaTEM-1；1 株产laTEM-1 和 blaCTX-M-15。另外 3 株未检测到产金属 β中，1 株仅携带 blaCTX-M-65 基因，1 株仅携带 blaTEM bla CTX-M-15 基因。6 株耐碳青霉烯大肠埃希菌患者相未检测出 KPC、VIM、GES、IMP、GIM 及 OXA 等其他均未检测出 qnrA、qnrB、qnrS 等喹诺酮类药物耐药基因

电泳图谱,基因,脓液,碳青霉烯

注：M：DNAmaker图 5 NDM 基因阳性株电泳图谱，DC10、DC44、DC52 为 ND表 5 6 株耐碳青霉烯大肠埃希菌患者相关资料信息Table 5 Information about Carbapene-resistant E.coli patientsTA同验碳青酶烯基因 β-内酰胺酶基因序列分型标本类型科室 + blaNDM-1 744 脓液肝胆外科胆blaNDM-1+ blaNDM-3 TEM-1 CTX-M-15 7219 脓液骨科 blaNDM-3 CTX-M-15+ blaNDM-1 TEM-1 167 脓液胃肠外科急blaNDM-1- CTX-M-65 血液神经外科大

【参考文献】