柠檬酸处理血小板表面HLA抗原的可行性研究

发布时间：2020-08-16 19:31

【摘要】：目的:部分血小板输注无效(platelet transfusion refractoriness,PTR)的原因为患者血清中含有针对血小板表面人白细胞抗原((human leukocyte antigen,HLA)的抗体。本研究拟探讨柠檬酸是否能有效洗脱血小板表面的HLA,并验证柠檬酸洗脱过程对血小板形态学、常规指标、聚集功能的影响,以明确柠檬酸处理血小板这一技术的有效性和可行性,为进一步制定HLA抗体阳性PTR患者的紧急血小板输注策略提供参考。方法:首先进行实验条件优化:将血小板与pH分别为3,4,5的柠檬酸反应,测定处理后血小板表面HLA-I类抗原的表达率,根据最小的HLA-I类抗原表达率来选定能够有效处理血小板表面HLA-I类抗原的最佳pH值;再根据析因设计的原理,对其他实验条件(反应时间、反应体积比)进行优化。然后将血小板进行分组处理:酸处理组用柠檬酸处理血小板,PBS处理组用PBS处理血小板,未处理组用乏血小板血浆(platelet poor plasma,PPP)来调节血小板浓度,使之与酸处理组和PBS处理组的浓度一致。最后将处理过的三组血小板进行以下各项分析:流式细胞仪分析血小板表面HLA-I类抗原和CD62P抗原的表达率,显微镜油镜下观察血小板的形态,血细胞分析仪检测血小板的常规指标,生化分析仪评估血小板的生化指标,分光光度计评估血小板的低渗休克反应(hypotonic shock response,HSR),血栓弹力图分析仪(thromboelastogram,TEG)检测血小板聚集功能。结果:1.pH为3,4,5的柠檬酸处理血小板后,血小板表面HLA-I类抗原的表达率分别为51.21±2.02%、79.04±2.66%、80.91±2.31%。2.pH=3、反应时间为5 min、柠檬酸与血小板的体积比为5:1是柠檬酸洗脱血小板HLA-I类抗原最适宜的条件。3.柠檬酸能洗脱血小板表面约80%的HLA-I类抗原,血小板活化标志物CD62P的表达率从4.17±3.54%增至8.89±5.70%(P0.05)。4.酸处理后血小板平均体积(mean PLT volume,MPV)、血小板分布宽度(PLT distribution width,PDW)分别从9.05±0.14 fL、8.53±0.28fL增至11.54±0.81 fL、11.08±0.68 fL(P0.05)。5.显微镜下酸处理后的血小板未见明显的聚集。6.未处理组、PBS处理组、酸处理组的HSR值分别为51.65±6.56%、54.95±6.32%、62.05±8.14%。7.酸处理后的血小板代谢功能稍增强。8.TEG提示酸处理组和PBS处理组的血小板聚集功能均有所下降。结论:pH=3的柠檬酸能有效洗脱血小板表面大部分的HLA-I类抗原,但其洗脱过程对血小板的结构、功能可造成一定程度的损害,临床使用前应充分衡量其利弊。酸处理血小板有望作为体内含有HLA抗体的PTR患者的紧急输血策略之一。
【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R446.6

【相似文献】