金黄色葡萄球菌耐药性及ε-PL对其生物膜形成的影响

发布时间：2020-08-25 11:47

【摘要】：金黄色葡萄球菌(S.aureus)耐药性及致病性问题日益突出,给临床抗感染治疗带来巨大挑战。生物膜(BF)在加强细菌耐药性的同时干扰宿主免疫系统的识别和杀伤机制,是慢性感染的主要原因之一。本课题主要通过ε-聚赖氨酸(ε-PL)干预金黄色葡萄球菌,观察ε-PL对其生物膜形成的影响,旨在明确该院金黄色葡萄球菌耐药特性的同时为新型抗感染药物的研发提供理论依据。目的:了解某院金黄色葡萄球菌耐药特征,评价MALDI-TOF MS在鉴定临床分离菌的应用价值;调查金黄色葡萄球菌生物膜形成并探究ε-PL对其生物膜形成的影响。方法:收集2016年9月至2017年9月间分离的金黄色葡萄球菌,用MALDI-TOF MS对菌种进行确认,K-B法进行药敏检测并用WHONET5.6软件分析结果。选取金黄色葡萄球菌100株,刚果红平板法筛选生物膜阳性株,聚合酶链式反应(PCR)法检测icaA/icaD基因分布,常量肉汤稀释法测定ε-PL对金黄色葡萄球菌最低抑菌浓度(MIC),酶标仪测量吸光度法观察ATCC25923和USA300的生长曲线,结晶紫染色法检测ε-PL对生物膜形成的影响并通过扫描电镜(SEM)观察。结果:经临床鉴定及MALDI-TOF MS确认,共分离金黄色葡萄球菌417株。标本主要来源于伤口拭子,科室来源以烧伤科为主。除万古霉素、利奈唑胺外,金黄色葡萄球菌对其他常用抗菌药物均呈现出不同程度耐药。417株金黄色葡萄球菌包括238株MRSA、179株MSSA,分别占57.1%和42.9%。除复方新诺明、利奈唑胺、万古霉素及奎奴普丁/达福普汀外,其余几种抗菌药物耐药率的组间差异均具有统计学意义(P0.05)。100株金黄色葡萄球菌中79株生物膜阳性,阳性率为79.0%(79/100),包括41株MRSA和38株MSSA;icaA、icaD基因检出率均为78.0%,生物膜阳性和阴性金黄色葡萄球菌icaA/icaD基因阳性率为94.9%及14.3%;ε-PL对金黄色葡萄球菌的MIC为31.25mg/mL;高ε-PL浓度抑制细菌的生长。1/2MICε-PL能显著抑制金黄色葡萄球菌生物膜的形成。结论:MALDI-TOF MS可快速准确鉴定出金黄色葡萄球菌。金黄色葡萄球菌主要分离自烧伤科,易引起伤口感染,并对临床常用抗菌药物耐药率较高,且MRSA普遍高于MSSA。icaA/icaD基因与金黄色葡萄球菌生物膜形成密切相关。ε-PL作为一种安全、高效的天然防腐剂,能有效抑制金黄色葡萄球菌的生长及其生物膜的形成。
【学位授予单位】：甘肃中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R446.5
【图文】：

革兰染色,金黄色葡萄球菌,头孢西丁,纸片法

3 实验结果3.1 革兰染色及显微镜观察结果金黄色葡萄球菌是革兰染色呈阳性的球菌（图2）。图2 金黄色葡萄球菌革兰染色结果Figure 2 Gram staining microscopy results of Staphylococcus aureus3.2 API 细菌鉴定结果2016年9月至2017年9月期间共收集非重复细菌3120株，其中被鉴定为金黄色葡萄球菌的有417株。3.3 头孢西丁纸片法鉴定 MSSA 和 MRSA将经传统细菌鉴定方法鉴定为金黄色葡萄球菌的417株菌株用头孢西丁纸片法筛选MRSA和MSSA。结果显示MRSA为238株，MSSA为179株。3.4 PBP2a 蛋白乳胶凝集实验结果以USA300和ATCC25923分别作为阳性和阴性对照，将头孢西丁纸片法鉴定

实验结果,金黄色葡萄球菌,细菌鉴定,生化

图3 MRSAPBP2a蛋白凝集实验结果注：A, B：临床MRSA分离株；C: 阳性对照（USA300）；D: 阴性对照（ATCC25923）Figure 3 The results of MRSA screen latex agglutinationRemarks: A, B: Clinical MRSA strains; C: Positive control (USA300);D: Negative control(ATCC25923)质谱鉴定结果417 株经临床常规细菌鉴定方法鉴定为金黄色葡萄球菌的菌DI-TOF MS 菌种确认后均判定为金黄色葡萄球菌，结果与API生化鉴本一致。MALDI Biotyper鉴定得分≥2.000的有352株，占85.64%；得0-1.999之间的有59株，占14.36:%；未发现MALDI Biotyper鉴定得分低于床分离株。临床分离的金黄色葡萄球菌经MALDI-TOF MS鉴定分析后均得到相应

金黄色葡萄球菌,质谱图,检测结果,质谱

BC图4 金黄色葡萄球菌MALDI-TOF-MS 检测结果质谱图A：10个主要细菌质谱峰；B：11个主要细菌质谱峰；C：14个主要细菌质谱峰Figure 4 Fingerprints of Staphylococcus aureus by MALDI-TOF-MS testA: 10 main mass spectrum peaks; B: 11 main mas

【参考文献】