IL-6过表达慢病毒稳转细胞系构建及其对HBsAg、HBeAg和HBV-DNA的影响
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R512.62;R440
【图文】：
图1 PCR获得IL-6片段M：Marker；1～8：57、58、59、60、61、62、63、64 ℃目的基因温度梯度PCR结果3.2 MIGR1-IL-6慢病毒载体质粒酶切及测序鉴定 目的基因PCR引物序列两端分别添加BglⅡ和EcoRⅠ酶切位点序列，PCR技术扩增酶切后，与pMIGR1连接，用限制性内切酶BglⅡ和EcoRⅠ酶切重组质粒，结果显示目的基因与载体被切开，如图3A所示。将酶切结果正确的菌液进行测序，测序结果完全符合，无突变。表明IL-6慢病毒表达载体构建成功，如图3B、3C所示。
图2 pMIGR1载体双酶切以及pMIGR1与IL-6连接产物测序结果A：载体质粒双酶切结果；M：Marker；1：pMIGR1载体原质粒；2：pMIGR载体双酶切后质粒；B：重组质粒测序结果序列图；C：重组质粒测序结果峰图3.3 电化学发光法检测Huh7/con和Huh7/IL-6稳转细胞系上清中IL-6表达水平 使
安徽医科大学硕士学位论文32图3 电化学发光法检测Huh7/IL-6细胞上清中IL-6的表达情况与Huh7/con组比较：****P<0.000 13.4 qRT-PCR检测Huh7/con和Huh7/IL-6稳转细胞系中IL-6的mRNA水平 采用qRT-PCR 检测 Huh7/con 和 Huh7/IL-6 细胞系 IL-6 mRNA 表达水平，结果显示Huh7/IL-6细胞系IL-6表达水平较Huh7/con升高约600倍（t=19.8，P<0.000 1），如图4所示。图4 qRT-PCR检测Huh7/IL-6细胞上清中IL-6的表达情况与Huh7/con组比较：****P<0.000 13.5 pcDNA1.3质粒转染不同细胞48h后不同时间段细胞上清中IL-6表达水平pcDNA1
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本文编号：2804023
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