磷霉素对产KPC酶肺炎克雷伯菌的体外抗菌活性及耐药机制研究

发布时间：2020-08-26 00:04

【摘要】：目的:测定磷霉素对临床分离KPC-KP的最低抑菌浓度(MIC)。在此基础上测定磷霉素联合多黏菌素E、替加环素对KPC-KP的联合药敏及时间杀菌曲线,评价磷霉素联合多黏菌素E、替加环素对KPC-KP的抗菌效果。根据耐药突变选择窗(MSW)理论,测定磷霉素、多黏菌素E、替加环素单药及磷霉素分别联合两药的防突变浓度,测定联合用药防止耐药发生能力。初步探究KPC-KP对磷霉素的耐药机制。方法:(1)使用琼脂平板倍比稀释法测定磷霉素对70株KPC-KP的MIC。(2)选取对磷霉素敏感的KPC-KP菌株,使用琼脂平板倍比稀释法测定多黏菌素E、替加环素对25株KPC-KP的MIC,使用微量棋盘稀释法测定磷霉素分别联合多黏菌素E、替加环素的联合药敏,计算FIC。根据各药MIC及药代动力学,测定并绘制磷霉素、多黏菌素E、替加环素及磷霉素分别联合多黏菌素E、替加环素对6株KPC-KP的时间杀菌曲线。(3)根据前部分研究结果,使用琼脂平板倍比稀释法测定磷霉素、替加环素、多黏菌素E及联合用药对10株对磷霉素敏感KPC-KP的防突变浓度(MPC)。(4)使用PCR技术提取并测定耐药突变菌株MurA、uhpT、glpT基因,将临床耐药菌、临床敏感菌、体外实验筛选耐药菌进行对比。结果:临床分离的70株KPC-KP对磷霉素敏感率为35.71%。联合药敏显示磷霉素联合多黏菌素 E 时,FIC≤0.5 占 20%,0.5FIC1 占 52%,FIC=1 占 16%,1FIC≤2占12%,磷霉素联合替加环素时,FIC≤0.5占8%,0.5FIC1占64%,FIC=1占20%,1FIC≤2占8%,未见FIC2。时间杀菌曲线磷霉素联合多黏菌素E、替加环素杀菌效果优于单药,磷霉素联合多黏菌素E可完全清除细菌。测定磷霉素、多黏菌素E、替加环素对KPC-KP的MPC,磷霉素为2048mg/L,多黏菌素E为64至256mg/L,替加环素为4至32mg/L。磷霉素联用多黏菌素E、替加环素后MPC稍有下降。MPC筛选出磷霉素耐药突变菌可见MurA、uhpT、glpT基因突变。结论:(1)临床分离的70株KPC-KP对磷霉素有一定的抗菌活性。(2)联合药敏结果提示磷霉素与多黏菌素E、替加环素对大部分KPC-KP菌株呈协同作用,对部分菌株呈相加或无关作用,无拮抗作用。时间杀菌曲线发现磷霉素联合多黏菌素E或替加环素杀菌效果优于单药。(3)磷霉素、多黏菌素E、替加环素单药MPC高于血药浓度,MSW过宽,单独应用易出现耐药。磷霉素联合多黏菌素E或替加环素时,MPC下降不明显,联合用药限制耐药效果不理想。(4)KPC-KP对磷霉素的耐药与MurA、uhpT、glpT基因突变相关,上述基因突变可能影响细菌正常功能。
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R446.5
【图文】：

图１：磷霉素累计耐药百分比（ｎ＝７０）逡逑用临床时间长，因其抗菌谱广、价格低廉广泛应用于各类染，对包括肠球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌在内的多有杀菌活性ｎ７’１８］。肺炎克雷伯菌是常见的院内致病菌，临喹诺酮类、碳青霉烯类抗生素治疗，随着抗生素应用的不种抗生素的耐药性不断增强。肺炎克雷伯菌可通过产生药物作用靶点结构等机制产生耐药性。产碳青霉烯酶为肺炎性的重要机制，多种碳青霉烯酶如ＫＰＣ、ＭＢＬ、ＮＤＭ－１、ＩＭＰ年美国北卡罗来纳首次发现产肺炎克雷伯碳青霉烯酶的来，ＫＰＣ－ＫＰ临床分离率逐年升高［２°］。文献报道肺炎克雷［２１〃２］

逦解放军医学院硕士学位论文逦逡逑单药ＭＩＣ邋（图２）。后分别吸取比浊稀释后的菌液ｌＯＯｕｌ滴入９６孔板中，并记录各菌逡逑株位置，１号、Ｈ号单药孔加入５０邋ｕｌ灭菌ＭＨＢ，使９６孔板各孔均有２００邋ｕｌ液体，逡逑最终菌液浓度约为５ｘｌＯｓＣｆｕ／ｍｌ。将９６孔板置于微量振荡仪振荡约４５秒，使孔内液逡逑体充分混合，后移至恒温培养箱中以３７°Ｃ温度培养２０ｈ，观察并记录实验结果，孔内逡逑浑浊或底部可见沉渣判定为有细菌生长，孔内液体清亮，底部未见沉渣判定为无细菌逡逑生长。逡逑ＦＩＣ逦９６孔板逡逑

加环素、多黏菌素Ｅ单药对ＫＰＣ－ＫＰ的ＭＩＣ结果按ＣＬＳＩ及ＦＤＡ标果如表２所示。替加环素ＭＩＣｍ＝邋ｌｍｇ／Ｌ，ＭＩＣｍ＝２邋ｍｇ／Ｌ，多黏菌素？邋５ｍｇ／Ｌ，ＭＩＣ９ｆｌ＝邋０．邋５ｍｇ／Ｌ。逡逑表２：磷霉素、多黏菌素、替加环素对ＫＰＣ－ＫＰ单药ＭＩＣ邋（ｎ＝２５）逡逑药物邋ＭＩＣ５０邋ＭＩＣ９０邋Ｓ逡逑磷霉素逦６４逦６４逦１００逡逑多黏菌素Ｅ邋０．５逦０．５逦１００逡逑替加环素邋１逦２逦１００逡逑素联合替加环素、多黏菌素Ｅ药敏结果，磷霉素联合替加环素时，ｍｇ／Ｌ，ＭＩＣ９（）＝３２ｍｇ／Ｌ，替加环素邋ＭＩＣＭ＝ｌｍｇ／Ｌ，邋ＭＩＣ９［）＝２ｎｉｇ／Ｌ，磷霉素时，磷霉素邋ＭＩＣｗ＝８ｍｇ／Ｌ，ＭＩＣＭ＝３２ｍｇ／Ｌ，多黏菌素邋ＭＩＣｍ＝０．邋１２

【参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 崔俊昌;抗菌药物防突变浓度及其临床意义[J];国外医学(呼吸系统分册);2003年06期

本文编号：2804375