无乳链球菌的耐药性及耐药机制研究

发布时间：2020-08-27 23:09

【摘要】：无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)又名 B 群链球菌(Group B Streptococcus,GBS),是一种寄生于人类下消化道及泌尿生殖道的条件致病菌。在宿主免疫力下降、泌尿生殖道微生态失衡、无乳链球菌定植部位改变等情况下,可以导致无乳链球菌的感染。无乳链球菌感染给人类健康尤其是孕产妇及新生儿健康造成极大的危害,美国疾病预防与控制中心(CDC)发布的指南建议对所有的妊娠35-37周的孕妇进行阴道和直肠无乳链球菌定植的产前筛查,并对确定携带有无乳链球菌的妇女或存在危险因素的妇女进行产时抗生素预防。随着抗生素的使用,细菌的耐药情况不容忽视。本课题的目的是研究无乳链球菌的耐药性及耐药机制,以期为临床防治无乳链球菌感染用药提供依据。本课题共分为以下两个部分:一、无乳链球菌的耐药性研究本研究为回顾性分析,收集了南方医科大学珠江医院2008年至2018年临床分离出的共计620株(已剔除同一患者分离出的相同菌株)无乳链球菌的药物敏感性实验结果及菌株信息。菌株自住院部或门诊就诊者阴道分泌物、血液、尿液或者脑脊液等临床标本中分离后,经鉴定并行药物敏感性试验。用WHONET进行数据统计,并分别按年份、就诊者年龄、标本来源、菌株为定植菌或感染菌将菌株进行分组,分析无乳链球菌耐药率及不同组间耐药率的差异。用SPSS20.0作统计学分析,计数资料用率表示,组间比较采用χ2检验,以P0.05为差异有统计学意义。620株菌中未分离出对青霉素G、氨苄西林、万古霉素、利萘唑胺和喹奴普丁/达福普丁耐药的菌株,对四环素、红霉素、克林霉素及左氧氟沙星的耐药率分别为86.8%、57.4%、38.6%、25.3%。青霉素仍可作为本院防治无乳链球菌的首选药物。红霉素及克林霉素作为防治无乳链球菌感染的二线用药,临床应对其应用价值重新评估。2008-2018年间,无乳链球菌对红霉素、克林霉素、四环素、左氧氟沙星的耐药率在不同年份间的差异无统计学意义(P0.05)。无乳链球菌对红霉素、克林霉素、四环素、左氧氟沙星的耐药率在不同年龄患者、菌株是定植菌还是感染菌之间的差异无统计学意义(P0.05)。无乳链球菌对红霉素、克林霉素、四环素的耐药率在不同来源标本之间的差异无统计学意义(P0.05),生殖道分泌物、尿液较血液及脑脊液中分离出的无乳链球菌对左氧氟沙星的耐药率高,差异有统计学意义(P0.05)。临床防治无乳链球菌感染用药时应当完善药敏试验,针对药敏结果个体化用药。二、无乳链球菌的耐药机制研究对2012.9-2017.9南方医科大学珠江医院分离出的无乳链球菌中的29株进行了全基因组测序,其中15株来自分泌物,9株源自血液,4株源于脑脊液,1株源自胎膜。通过药物敏感性试验及生信分析对这29株菌的耐药表型及耐药基因进行分析,研究本组无乳链球菌的耐药机制。结果显示29株菌对红霉素及克林霉素的耐药表型主要是cMLSB型,其次是M型和iMLSB型,同时有L型检出。29株菌中26株对四环素耐药,5株对左氧氟沙星耐药。本组无乳链球菌对红霉素耐药的机制主要为erm(B)基因介导23SrRNA结合位点的甲基化和mef(A)基因介导的大环内酯类外排泵。本研究中有8株菌有mef(A)基因且距其110-120bp处的下游均有msr(D)基因,7株菌有林可酰胺类耐药基因lnu(B)且距其53bp处的上游均有Isa(E)基因,目前这方面的研究少见。无乳链球菌对红霉素及克林霉素的耐药受多个基因调控,其相互作用机制及分子特征有待深入探讨。本组无乳链球菌对四环素耐药主要是由tet(M)和tet(O)基因编码核糖体保护蛋白导致,同时有编码外排泵蛋白的tet(L)和编码核糖体保护蛋白的tet(S)检出。另外检出一株含有嵌合基因tet(O/W/32/0)的耐四环素菌株,目前在无乳链球菌中尚未见报道。对左氧氟沙星耐药的5株菌均未检出氟喹诺酮类耐药基因,推测对喹诺酮类的耐药由喹诺酮耐药性决定区(quinolone resistance determining regions,QRDRs)GyrA亚基(由gyrA编码)和(或)ParC亚基(由parC编码)发生氨基酸突变引起,或者存在其他的耐药机制,这有待下一步验证。
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R446.5
【图文】：

无乳链球菌,耐药率

探宄不同类型标本中分离出的无乳链球菌的耐药率差异。因分离自脑逡逑脊液中的菌株数较少，考虑到脑脊液与血液同为无菌体液，故与血液一同归类逡逑分析。不同类型标本中分离出的无乳链球菌的耐药率见表１－６及图１－２。结果显逡逑示不同标本之间，无乳链球菌对红霉素、克林霉素、四环素的耐药率差异无统逡逑计学意义（Ｐ＞0．0５），对左氧氟沙星的耐药率差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。逡逑进一步两两比较不同标本分离出的无乳链球菌对左氧氟沙星的耐药率，结果显逡逑示生殖道分泌物与尿液中无乳链球菌对左氧氟沙星的耐药率差异无统计学意义逡逑（Ｘ２＝0．１６５，Ｐ＝０．６８５），生殖道分泌物与血液及脑脊液中无乳链球菌对左氧氟沙逡逑星的耐药率差异有统计学意义（Ｘ２＝８．３８３，邋Ｐ＝０．００４），尿液与血液及脑脊液标本逡逑中无乳链球菌对左氧氟沙星的耐药率差异有统计学意义（Ｘ２＝９．６４４，邋Ｐ＝０．００２）。逡逑１３逡逑

无乳链球菌,耐药率

定植与人体中不引起任何症状，又可致机体感染。将本实验菌株分为定植菌与逡逑感染菌并比较其耐药性差别，分析耐药性在菌株是定植菌还是感染菌之间有无逡逑差异。无乳链球菌定植菌与感染菌的耐药率见表１－８及图１－４。结果表明，无乳逡逑链球菌为定植菌或感染菌两种情况下，其对红霉素、克林霉素、四环素和左氧逡逑氟沙星的耐药率差异无统计学意义（均有Ｐ＞0．0５）。逡逑表１－８无乳链球菌为定植菌或感染菌的耐药率（％）逡逑Ｔａｂｌｅ邋１－８邋Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ邋ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ邋ｒａｔｅｓ邋ｏｆ邋ｃｏｌｏｎｉｚｅｄ邋ｏｒ邋ｉｎｆｅｃｔｅｄ邋Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ邋ａｇａｌａｃｔｉａｅ邋（％）逡逑抗菌药物逦定植菌逦感染菌逦七逦户值逡逑红霉素逦６８．４邋（１３／１９）逦５６．４邋（１１５／２０４）逦１．０３２逦０．３１０逡逑克林霉素逦３６．１邋（３９／１０８）逦３９．３邋（１５８／４０２）逦０．３６６逦０．５４５逡逑四环素逦８６．９邋（９３／１０７）逦８６．８（３２９／３７９）逦０．００１逦０．９７７逡逑左氧氟沙星逦２７．１（３６／１３３）逦２４．８（

分布图,测序,产量统计,质控

１）质控数据产量统计逡逑菌株Ａ７６６的质控数据产量统计见表２－６。逡逑表２－６邋Ａ７６６质控数据产量统计逡逑Ｔａｂｌｅ邋２－６邋Ｑｕａｌｉｔｙ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｄａｔａ邋ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ邋ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ邋ｏｆ邋Ａ７６６逡逑ｐｌｅ—ｎａｍｅ逦ｔｏｔａｌ＿ｒｅａｄｓ逦ｔｏｔａｌｂａｓｅ（ｂｐ）逦Ｑ２０＿ｂａｓｅ逦Ｑ２０（％）逡逑６６．ｆｑ逦１５０３５６４４逦２０７１５１４７７０逦１７５１５６９９９５逦０．８４５５５逡逑２）测序碱基的含量分布逡逑根据碱基互补配对原则，Ｇ／Ｃ、Ａ／Ｔ含量应该分别相等，并在整个测序基本保持稳定，呈水平线。菌株Ａ７６６的测序碱基含量分布见图２－１。从碱量分布图来看，在Ｒｅａｄｓ的头端和末端出现ＧＣ和ＡＴ含量不相等的情况，逡逑间部分Ｇ／Ｃ、Ａ／Ｔ含量基本接近。头端不相等可能是由于随机打断时接头错误匹配，末端不相等可能是由于测序长度越长，碱基错误率越高的原因致。逡逑Ｓｅｑｕｅｎｃｅ邋ｃｏｎｔｅｎｔ邋ａｃｒｏｓｓ邋ａｌｌ邋ｂａｓｅｓ逡逑

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