失血性休克大鼠肠淋巴液对人脐静脉内皮细胞转录组影响的初步分析

发布时间：2020-08-28 05:39

【摘要】：失血性休克在临床常见,失血性休克引起的细胞损伤是发生急性肺损伤、肠屏障功能障碍乃至多器官功能障碍综合征等的重要原因,也是发展为难治性休克一个基本机制。失血性休克引起远端器官结构损伤和功能障碍的机制受到关注。目前认为,肠源性毒性物质经肠淋巴途径回流到全身,是失血性休克导致无菌性多器官损伤的一个主要途径。失血性休克后,在肠淋巴液通过胸导管直接流入锁骨下静脉、进入血液循环系统的过程中,血管是第一个暴露于休克肠淋巴液(post hemorrhagic shock mesenteric lymph,PHSML)的部位,PHSML引起的细胞损伤与功能障碍是失血性休克引起血管通透性增高、血管反应性降低、器官损伤的主要原因。众多研究表明,以减少PHSML回流为目标的治疗措施对于防治重症休克具有积极意义。血管内皮细胞损伤是血管高通透性的基础,PHSML回流参与了失血性休克引起血管高通透性的病理过程,但详细的分子机制,还不是非常清楚。为此,本研究应用基因转录组学技术,观察PHSML对人脐静脉血内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)基因转录组的影响,通过差异表达基因的聚类分析(GO)和KEGG通路富集分析,明确PHSML损伤HUVECs的主要信号分子与信号通路,希望能加深对PHSML损伤内皮细胞分子机制的了解,以期针对PHSML为重症失血性休克的防治提供新的思路。应用健康雄性大鼠,常规方法建立失血性休克模型:股动脉放血,维持血压40 mm Hg持续90 min后,液体复苏。液体复苏结束后,行腹部手术,常规方法引流肠淋巴液,为PHSML。另取一组健康雄性大鼠,全身麻醉后,常规方法引流肠淋巴液,为正常肠淋巴液(normal mesenteric lymph,NML)。随后,分别应用生理盐水(Control)、NML、PHSML(终浓度为10%)与HUVECs孵育,3 h后留取HUVECs,提取m RNA,采用新一代测序技术对三组细胞进行测序分析。测序结果显示,Control与NML组HUVECs的转录组几乎没有差异;相对于NML,PHSML作用后HUVECs有多个差异表达基因。进一步应用GO和KEGG分析PHSML与NML的差异表达基因,发现这些差异表达基因主要与凋亡、应激等生物过程相关,主要富集在NOD样受体(nucleotide oligomerization domain-like receptor,NLR)信号通路、核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)信号通路和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)信号通路,这三条信号通路以及相关差异表达的基因均与炎症反应有关。为了验证基因转录组学测序技术发现的差异表达基因,应用实时荧光定量PCR检测了BIRC3、NFKBIA、CXCL1、ICAM-1、CCL2、TNFAIP3、JUNB等7个差异表达基因的m RNA表达,结果显示这些基因的RT-PCR结果与RNA-Seq结果一致。鉴于趋化因子CCL2在细胞损伤中的作用,本文观察了CCL2抑制剂对PHSML损伤HUVECs的影响,结果显示,CCL2抑制剂可以显著改善PHSML处理后HUVECs的细胞增殖状态。通过上述研究,初步揭示了PHSML损伤内皮细胞的机制与NLR、NF-κB、TNF信号通路介导的炎症反应有关,抑制CCL2有利于减轻PHSML引起的内皮细胞损伤。研究结果加深了休克肠淋巴液损伤血管内皮细胞分子机制的理解,为防治重症失血性休克提供了新的视角。
【学位授予单位】：河北北方学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R459.7

【参考文献】