多重耐药鲍曼不动杆菌的生物学特征及Eravacycline耐药机制研究

发布时间：2020-10-01 19:11

　　多重耐药鲍曼不动杆菌感染死亡率高,治疗困难,医疗负担大,已成为全球性的公共卫生问题。近年来黏液型多重耐药鲍曼不动杆菌在临床中逐渐增多。替加环素和多粘菌素是治疗多重耐药鲍曼不动杆菌感染的最后防线,然而随着抗生素的使用,替加环素或多粘菌素耐药的鲍曼不动杆菌在不断出现。Eravacycline是一种新型的全合成四环素类抗生素,对多重耐药菌仍有着较好的活性。本研究将分为两个部分,研究黏液型多重耐药鲍曼不动的生物学特征以及多重耐药鲍曼不动杆菌对Eravacycline的耐药机制。第一部分收集了 56位临床患者的60株鲍曼不动杆菌,其中黏液型鲍曼不动杆菌56株,非黏液型4株。先收集患者的临床资料,再观察菌落形态、儮膜形态,测定抗生素敏感性,用结晶紫染色法测定生物膜形成能力,对所有菌株进行全基因组测序后进行核心基因组多位点序列分型(cgMLST)和耐药基因分析,最后选取部分代表菌株进行大蜡螟感染毒力试验。结果显示:黏液型鲍曼不动杆菌感染病程重,治疗困难,预后不佳。其菌落湿润粘稠,易融合,可有拉丝现象。基本所有黏液型鲍曼不动杆菌(98.2%)均为多重耐药菌,头孢哌酮舒巴坦、替加环素和多粘菌素的耐药率相对较低,分别为15.0%、35.0%和3.3%,对Eravacycline的耐药率最低,为1.7%。和非黏液型鲍曼不动杆菌相比,黏液型鲍曼不动杆菌具有明显的荚膜结构,但在生长速度和生物膜形成能力方面没有差异。根据cgMLST分析,黏液型鲍曼不动杆菌主要的ST型为ST191和ST195,其中ST191的菌株毒力可能较强,而ST195的菌株毒力较弱。第二部分主要对多重耐药鲍曼不动杆菌MDR-ZJ06进行了一系列体外Eravacycline诱导实验,获得2株Eravacycline耐药菌株。利用全基因组测序技术,比较分析亲本菌株和耐药菌株的全基因组序列,发现基因adeS出现三个碱基的缺失突变,可能与Eravacycline耐药相关。外排泵泵抑制实验证明耐药菌株的外排泵抑制剂抑制表型为阳性,进一步用qRT-PCR 比较亲本菌株和耐药菌株的外排泵表达量,发现耐药菌株的外排泵adeABC表达显著上调。对耐药菌株回补野生型adeS后,发现外排泵adeABC的表达量恢复正常,且Eravacycline的敏感性提高了 4倍。这说明adeS的缺失突变介导外排泵adeABC表达上调,这可能是引起Eravacycline耐药的重要机制之一。综上所述,黏液型鲍曼不动杆菌具有明显的儮膜结构,其生长速度和生物膜形成能力与非黏液型鲍曼不动杆菌相似,主要的ST型为ST191和ST195,其中ST191的菌株毒力可能相对较强,而ST195的菌株毒力较弱。黏液型鲍曼不动杆菌多重耐药率高,对Eravacycline的耐药率最低。其中adeS的缺失突变介导外排泵adeABC表达上调,可能是引起Eravacycline耐药的重要机制之一。
【学位单位】：浙江大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R446.5
【部分图文】：

菌落形态,鲍曼不动杆菌,菌落形态,耐药率

图１．２黏液型和非黏液型鲍曼不动杆菌菌落形态（Ａ）黏液型鲍曼不动杆菌４０３；逡逑（Ｂ）非黏液型鲍曼不动杆菌４０４；逡逑■逡逑图１．３．菌株Ｎ３５拉丝现象逡逑２．３抗生素敏感性测定结果逡逑检测６０株菌株对１１种抗生素的敏感性，结果见图１．４。菌株对头孢他啶、头逡逑孢吡肟、环丙沙星、美罗培南、亚胺培南的耐药率均高达９６．７％，其次是庆大霉素逡逑（８３．３％）和阿米卡星（７３．３％）。而对替加环素的耐药率为３５．０％，对头孢哌酮舒逡逑２２逡逑

菌落形态,菌株,现象,鲍曼不动杆菌

Ｉ逡逑（Ａ）逦（Ｂ）逡逑图１．２黏液型和非黏液型鲍曼不动杆菌菌落形态（Ａ）黏液型鲍曼不动杆菌４０３；逡逑（Ｂ）非黏液型鲍曼不动杆菌４０４；逡逑■逡逑图１．３．菌株Ｎ３５拉丝现象逡逑２．３抗生素敏感性测定结果逡逑检测６０株菌株对１１种抗生素的敏感性，结果见图１．４。菌株对头孢他啶、头逡逑孢吡肟、环丙沙星、美罗培南、亚胺培南的耐药率均高达９６．７％，其次是庆大霉素逡逑（８３．３％）和阿米卡星（７３．３％）。而对替加环素的耐药率为３５．０％，对头孢哌酮舒逡逑２２逡逑

菌落形态,鲍曼不动杆菌,耐药率,多粘菌素

【参考文献】