EGFR基因突变检测试剂盒的研制及应用

发布时间：2020-10-21 10:08

　　 表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)蛋白是普遍存在于细胞膜的一种跨膜蛋白,与细胞的信号转导有关,研究表明EGFR在许多实体肿瘤中存在高表达或异常表达。EGFR是研究非小细胞肺癌的一个重要靶点。EGFR基因发生突变导致EGFR蛋白的结构发生变化,使小分子靶向药物如厄洛替尼(特罗凯)与EGFR结合力发生变化,结合力的减弱或增强将直接影响厄洛替尼(特罗凯)的疗效。因此,肺癌患者在使用EGFR小分子靶向药物前对EGFR基因进行突变诊断是有必要的。在本文中,采用突变扩增凝滞(amplification refractory mutation system,ARMS)技术和TaqMan探针检测技术联合实现对EGFR基因突变的检测。采用重叠延伸法构建29种EGFR基因突变质粒,参考品采用质粒与基因组DNA的混合物,质粒采用构建的突变型质粒,基因组DNA采用正常人细胞中提取的基因组DNA,按照一定比例混合,使用这种混合物来模拟非小细胞肺癌患者的EGFR突变病理标本。针对不同的EGFR基因型设计了特异性的ARMS引物以及与之对应的TaqMan探针。为了方便检测,我们将29种EGFR基因突变分为E18、E19、E20、E21,T790M,S768I共6管反应来进行检测。本文构建的EGFR突变检测试剂盒,可检测EGFR基因的29个突变,占EGFR总突变的99%以上。EGFR突变试剂盒的检测灵敏度达到10 copies,分辨率达到1%(10~4 copies基因组背景下)。通过对109例临床标本进行了检测,该EGFR突变检测试剂盒能很好的区分EGFR基因突变阳性和阴性,特异性良好。与测序法相比(检测灵敏度10%)其灵敏度达到1%,且操作简单、耗时短,只需2小时即可完成检测和结果分析,更符合临床检测要求。
【学位单位】：长春理工大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R440
【部分图文】：

图 1-1 WHO 癌症致死统计对于女性来说，肺癌在新发现的癌症中排第 3 位，死亡率更是达到了第二位，仅次乳腺癌的致死率，而且中国女性肺癌的发病率（每 10 万妇女 20.4 例）是要高于一些洲国家女性的比率[2]。导致肺癌的因素很多，如烟草、煤炭燃烧的室内空气污染、炉灶和烹饪油烟等，还

图 2.1 EGFR 基因四个外显子 PCR 克隆电泳图M: DNA Marker DL2000; 1-4,EGFR 基因四个外显子 PCR 扩增产物取鉴定

质粒提取电泳结果
【参考文献】

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本文编号：2849985