中、低剂量中波紫外线诱导黑色素瘤细胞自噬与凋亡的初步探讨

发布时间：2020-11-12 22:04

　　 目的:探究中、低剂量中波紫外线(Ultraviolet B,UVB)对黑色素瘤细胞(A375)自噬与凋亡及其交互调控元件Beclin-1-Bcl-2-Bax的诱导效应。方法:1、用低剂量(10 mJ/cm~2)、中剂量(15mJ/cm~2)的UVB照射A375细胞,并于照射后3、6、9、12h时间点分别用单丹磺酰尸胺(MDC)染色法观察细胞自噬体形成的差异;2、用低剂量、中剂量的UVB照射A375细胞,并于照射后3、6、9、12h时间点分别用吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)染色法检测细胞凋亡的差异;3、用低剂量、中剂量的UVB照射A375细胞后,分别于18h、24h、36h、48h时间点,用细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞活性;4、用低剂量、中剂量的UVB照射A375细胞,并于照射后3、6、9、12h时间点提取细胞总蛋白,以及用剂量为2.5、5.0、7.5、10.0、15.0 mJ/cm~2的UVB照射A375细胞,于照射后9 h收集细胞总蛋白,并用Western blot法检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3,以及抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax的变化。结果:1、MDC染色结果显示:在观察的12h内,中低剂量UVB诱导的自噬效应随照后时间的延长,细胞自噬增强,但在中剂量UVB照射后12h,已观察到细胞自噬效应的降低;且对比中、低不同剂量同一时间点的自噬情况显示,中剂量UVB诱导的自噬效应比低剂量诱导的自噬效应强。2、AO/EB染色结果显示:中、低剂量诱导细胞凋亡均表现为随着照后时间的延长,凋亡细胞增多;且对比中、低不同剂量同一时间点的凋亡情况显示,中剂量UVB诱导的凋亡效应比低剂量诱导的凋亡效应强。3、CCK-8法检测细胞活性实验显示自照后48 h内,对照组、中、低剂量组之间细胞活性差异显著(p0.05),其顺序为:对照组低剂量组中剂量组;两两比较的结果显示自照射后24 h时间点起,中剂量组细胞活力低于低剂量组(p0.05)。4、Western blot检测自噬和凋亡相关蛋白显示,10mj/cm~2的UVB照射A375细胞后,在观察的12h内,自噬及凋亡相关蛋白的表达表现为随着时间的推移,自噬相关蛋白Beclin-1、LC3以及促凋亡蛋白Bax表达逐渐增高,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达逐渐降低;15mj/cm~2的UVB照射A375细胞后,自噬相关蛋白Beclin-1、LC3以及促凋亡蛋白Bax表达先逐渐增高,至照后9h最强,但在12h时可观察到Beclin-1、LC3表达降低;而Bax则在照后12h持续升高。9h时间点不同剂量UVB照射A375细胞后自噬相关蛋白Beclin-1、LC3逐渐增高直到10mj/cm~2时达到最高峰,15mj/cm~2时降低;Bax的表达随着剂量增加表达持续增高,而Bcl-2的表达随着剂量的增高逐渐减低。结论:1、中、低剂量UVB照射均可通过诱导自噬和凋亡来抑制A375细胞的活性;2、中、低剂量UVB照射影响A375细胞活性方式不同:在低剂量照射时,细胞诱导相对较弱的自噬以部分抵抗UVB对凋亡的诱导而使低剂量照射情况下的细胞活性较中剂量照射组增强。中剂量照射时,早期自噬和凋亡两者发挥协同作用,共同促进细胞凋亡,后期凋亡逐渐占主导效应。3、自噬和凋亡交互调控元件Beclin-1-Bcl-2-Bax在UVB照射的A375细胞中发挥了作用,共同决定细胞的命运。
【学位单位】：贵州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R739.5;R730.55
【部分图文】：

图 1 自噬的几种类型Fig.1 Several types of autophagy自噬的调控机制很复杂，哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target ofpamy,mTOR）是自噬中起着负调控作用的的核心分子之一[14]。目前己知 mTOR

图 2 参与自噬的信号通路，图片来自 CST 公司g.2 Signaling pathways involved in autophagy,Image courtesy of CST.由于紫外线辐射对皮肤造成的 DNA 损伤就是细胞自噬的诱导因素[21-22]，故文研究紫外线对细胞自噬的影响。
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本文编号：2881295