多重PCR检测鲍曼不动杆菌6种耐药基因位点及指导临床用药的研究

发布时间：2017-04-07 22:10

  本文关键词：多重PCR检测鲍曼不动杆菌6种耐药基因位点及指导临床用药的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:鲍曼不动杆菌(Aba,Acinetobacter baumannii),是临床常见的条件致病菌,随着临床样本中检出率及耐药率的上升,其对卫生健康事业带来很大威胁。本文旨在研究和验证一种新的检测方法——多重PCR,用于监测Aba的感染和耐药基因流行情况,并指导临床用药。方法:通过调查研究大量与Aba相关的耐药基因情况,以及我科室之前对82例Aba 14种耐药基因的初步筛查和实验条件的摸索,挑选出耐药机制明确、临床流行范围广的耐药基因。并综合考虑引物TM应相近、目的片段长度易区分的多重PCR实验基础,经大量预实验后,最终挑选出6种目的耐药基因,设计为引物复合物,用于多重PCR。随后,挑选我科室47株不同患者的Aba菌株验证多重PCR引物复合物灵敏性、稳定性和检出率,并与药敏试验结果进行比对分析。结果:多重PCR技术可同时检出多耐药Aba的blaOXA-23,Car O,aac(6′)-I,blaOXA-51,ant(3″)-I和intI1 6种耐药基因;且与单一PCR检测耐药基因结果一致,条带显示清晰、特异,经测序验证正确率100%。多重PCR检出的耐药基因与相应抗生素药敏结果关联密切,blaOXA-23阳性菌株中,IPM、MEM均耐药比率达98%;aac(6′)-I和ant(3″)-I双阳性的菌株中,AN与GM都耐药率达93.5%。结论:采用设计的含6个耐药基因的引物复合物,对菌株进行多重PCR检测,可省时、高效地检测出Aba的耐药基因,推测耐药类型,指导临床用药。
【关键词】：多重PCR 鲍曼不动杆菌 耐药基因 临床用药 药敏实验
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R440
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-12
• 第1章 前言12-14
• 第2章 综述14-22
• 2.1 鲍曼不动杆菌的流行情况14-15
• 2.2 本院 2011~2015年Aba检出率及耐药率情况15-18
• 2.2.1 Aba检出率变化情况15-17
• 2.2.2 Aba五年间亚胺培南、美罗培南耐药性变化情况17-18
• 2.3 鲍曼不动杆菌的耐药机制18
• 2.4 Aba相关耐药基因的播散机制18-21
• 2.4.1 鲍曼不动杆菌可移动遗传元件19
• 2.4.2 整合子(Int)19-20
• 2.4.3 插入序列(IS)20
• 2.4.4 转座子(Tn)20-21
• 2.4.5 质粒21
• 2.5 结论21-22
• 第3章 材料与方法22-34
• 3.1 材料22-24
• 3.1.1 标本来源22-23
• 3.1.2 试剂与仪器23-24
• 3.2 实验方法24-34
• 3.2.1 多重PCR的设计与引物复合物构建24-26
• 3.2.2 多重PCR方法检测Aba 6 种耐药基因26-29
• 3.2.3 多重PCR检测Aba耐药基因的验证29-30
• 3.2.4 多重PCR检测47株Aba的6个耐药基因30-31
• 3.2.5 菌株药敏结果与耐药基因的联系31-34
• 第4章 实验结果34-42
• 4.1 多重PCR的最佳退火温度34-35
• 4.2 多重PCR和单一PCR检测6种耐药基因的结果35-36
• 4.3 多重PCR检测47株Aba的结果36-38
• 4.4 多重PCR检测Aba耐药基因的测序结果38-40
• 4.5 多重PCR与临床用药的关联40-42
• 第5章 讨论42-47
• 5.1 碳青霉烯D类酶耐药基因流行42-43
• 5.2 氨基糖苷类耐药基因流行43
• 5.3 整合子的流行43-44
• 5.4 外膜孔蛋白流行44-45
• 5.5 多重PCR的评价45
• 5.6 多重PCR检测6个耐药基因的临床意义45-47
• 第6章 结论47-48
• 参考文献48-53
• 附表1 我科室82例鲍曼不动杆菌14种耐药基因筛查结果53-55
• 作者简介及在学期间所获得的科研成果55-56
• 致谢56

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 徐军;克丙申;齐法莲;陈英剑;罗南萍;;核酸序列测定技术分析HBV耐药基因与亚型鉴定[J];放射免疫学杂志;2007年02期

2 夏成静;陆学东;黄烈;刘键;杨来智;王琼;;MRFQ SYBR Green I-PCR结合融解曲线快速检测产ESBLs菌耐药基因[J];中国热带医学;2009年02期

3 张征;孙静娜;武艳;;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的红霉素耐药基因和杀白细胞基因的检测[J];广东医学;2009年07期

4 黄革;周晓红;蒋文玲;李运雄;荣卡彬;罗宪玲;赵莹;;多重PCR快速检测金黄色葡萄球菌中氨基糖苷类抗生素耐药基因及其临床应用[J];中国感染与化疗杂志;2009年04期

5 刘军军;张玮;王元兰;王星晨;魏建忠;孙裴;李郁;;沙门菌耐药基因多重PCR检测方法的建立[J];中国抗生素杂志;2013年11期

6 ;抗生素新耐药基因被捕获[J];中国临床康复;2003年09期

7 张燕;金先庆;赵珍珍;宿玉玺;;5种耐药基因在成人常见恶性肿瘤中的表达特点[J];重庆医科大学学报;2007年10期

8 ;耐药基因可从海洋细菌进入人体内细菌[J];医学研究杂志;2007年12期

9 胡庆丰;吕火祥;糜祖煌;沈蓓琼;;泛耐药肺炎克雷伯菌的耐药基因研究[J];中华医院感染学杂志;2009年13期

10 陈茶;黄彬;蓝锴;庞雪云;糜祖煌;;多药耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺类耐药基因研究[J];中华医院感染学杂志;2009年15期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 孔繁德;陆承平;彭海滨;徐淑菲;陈琼;;多重PCR技术检测沙门菌两种四环素耐药基因[A];第二届全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2008年

2 石燕华;李昌崇;;肺炎链球菌对β-内酰胺类及大环内酯类抗生素耐药基因的研究进展[A];第六届江浙沪儿科学术会议暨儿科学基础与临床研究进展学术班论文汇编[C];2009年

3 金先庆;李映良;向丽;李长春;罗庆;梁绍燕;宿玉玺;郑改焕;;五种耐药基因在15种332例儿童恶性肿瘤组织中表达的特点及临床应用[A];中国抗癌协会第七届全国小儿肿瘤学术会议论文汇编[C];2007年

4 莫非;;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因及消毒剂耐药相关基因的检测[A];第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2006年

5 王晶;韩丽霞;;耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药基因研究[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年

6 王凤玲;冯秀河;刘静;张竟宇;;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因及致病毒素基因的研究[A];第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议论文汇编[C];2009年

7 吕火祥;麇祖煌;胡庆丰;沈蓓琼;;泛耐药产酸克雷伯菌的耐药基因研究[A];2007年浙江省医学检验学学术年会论文汇编[C];2007年

8 雷永良;王晓光;陈秀英;;丽水市结核分枝杆菌分离株5种耐药基因突变特点分析[A];2011年浙江省医学会医学病毒学分会、医学微生物与免疫学分会学术年会论文汇编[C];2011年

9 李晨;;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性及耐药基因研究[A];中国医院协会第十四届全国医院感染管理学术年会资料汇编[C];2007年

10 胡红兵;熊宝华;夏维;王军;康世秀;;新生儿甲氧西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌血液感染分离株耐药基因研究[A];第六届全国抗菌药物临床药理学术会议论文集[C];2006年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 记者 徐志勇;深圳发现两个新型耐药基因[N];广东科技报;2007年

2 王其玲 李水根;抗生素新耐药基因被捕获[N];健康报;2003年

3 段军军　熊学莉;“探访”我国第一条肿瘤耐药基因[N];解放军报;2002年

4 本报记者 齐芳;人体肠道菌群耐药基因研究获新突破[N];光明日报;2013年

5 记者 鲍文娟邋通讯员 帅菲斐;深一医生全球率先发现两新耐药基因[N];广州日报;2007年

6 易运文;深圳医生全球首次发现耐药基因[N];光明日报;2007年

7 陈英云 乔蕤琳;我省专家首次确立控制耐药基因表达研究思路[N];黑龙江经济报;2010年

8 记者 陈枫;超级细菌蔓延?实为“耐药基因”![N];南方日报;2010年

9 记者 郭静 通讯员 郝黎 张丹娜;肺癌耐药基因找到了[N];广东科技报;2010年

10 张田勘;滥用抗生素让环境几度呻吟[N];中国绿色时报;2003年

中国博士学位论文全文数据库 前8条

1 李德喜;恶唑烷酮类耐药基因cfr和optrA在猪源MRSA和CoNS中流行及传播机制的研究[D];中国农业大学;2016年

2 鲁曦;低剂量抗生素刺激条件下耐药基因水平传播的机制研究[D];华南理工大学;2012年

3 鲁玉侠;食源微生物耐药基因水平传播抑制研究[D];华南理工大学;2010年

4 王晶;慢性阻塞性肺疾病急性加重多中心病原及耐药基因分子流行病学调查[D];中国人民解放军医学院;2014年

5 毛锦龙;Ⅱ-Ⅲ级星型细胞瘤体外诱导耐药细胞—干细胞基因及耐药基因研究[D];北京协和医学院;2010年

6 叶蕾;广州市水产养殖品中耐药共生菌分布及耐药基因传播机制的研究[D];华南理工大学;2012年

7 瞿婷婷;多重耐药肠球菌耐药基因筛选及传播机制研究[D];浙江大学;2007年

8 佟盼盼;鸡粪便菌耐药基因及其产ESBLs大肠杆菌耐药性的研究[D];吉林大学;2015年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 何红美;2014年石家庄地区围产期妇女B族链球菌的耐药性及其耐药基因的研究[D];河北医科大学;2015年

2 王佳Z

本文编号：291425