基于适配体毛细管电泳法与荧光开关法检测蛋白质

发布时间：2021-01-17 08:04

　　第一章:对核酸适配体的筛选技术和特点、毛细管电泳法和荧光分析法作了简要介绍,阐述了本论文的立题背景,所研究的主要内容和创新点。第二章:我们采用四甲基罗丹明（TMR）标记的含有29个碱基的适配体作为探针,详细研究了采用激光诱导荧光毛细管电泳法（CE-LIF）检测凝血酶体系当中,样品缓冲液中的金属离子(如Na⁺,Mg²⁺和K⁺)对适配体-凝血酶复合物峰面积的影响,并且在优化的条件下,实现了凝血酶的灵敏检测,检出限为0.1 nM,本方法具有很好的选择性,并且可以实现复杂基质中凝血酶的定量检测。第三章:我们建立了TMR标记的适配体作为亲和探针的CE-LIF检测人中性粒细胞弹性蛋白酶（HNE）的方法。在CE-LIF分析中,HNE-适配体复合物与未结合的适配体探针可以很好的分离。我们在HNE适配体的不同位点上修饰单个TMR染料,修饰位点包括5’末端,3’末端或适配体内部的T碱基。实验发现,在第40个T碱基上标记有TMR的适配体形成了较大的复合物峰。同时,我们研究了样品缓冲液中金属阳离子对CE-LIF检测HNE的影响。高浓度的K

【文章来源】：山西大学山西省

【文章页数】：117 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

SELEX示意图

目前，一些与疾病相关的蛋白质特异性并且被广泛应用于生命分析的各个领域。ombin）是由 308 个氨基酸残基组成，分子量为 3酸蛋白酶，在生理和病理的凝血过程中起着非常重板的聚集，以及纤维蛋白原和纤维蛋白单体之间的海默病，帕金森病，糖尿病和癌症等疾病的发生和，常用的凝血酶的 DNA 适配体有两种，分别是9 个碱基的 Ap29[29]。其结构如图 1.2 所示。首先T TGG TGT GGT TGG-3’，它与凝血酶的纤维蛋白为 100 nM[28]，而 Apt29 （5’-AGT CCG TGG TA’）与凝血酶的肝素结合位点结合，具有更高的亲 的亲和力高出 200 倍。利用适配体与凝血酶的高发展出多种检测凝血酶的新方法，如荧光分析法、20]。

适配体毛细管电泳法与荧光开关法检测为 17 nM[39]。利用适配体与 HNE些 HNE 的检测方法[40-42]。unoglobulin E, IgE）是由两条相同成的四肽链结构（图 1.3），它是滋病等疾病密切相关[43-48]。目前构如图 1.4 所示，是一个发夹结构 CCT AGT GGC GTG CCC C-3’，力，其已经被应用于多种形式的细管电泳法等[4, 9, 20, 51-59]。

【参考文献】：
期刊论文
[1]荧光分析法在药物分析中的应用研究进展[J]. 王永利,张江伟,王立华,敖登高娃,黄慧婷,李美红.  中国实验方剂学杂志. 2011(12)
[2]毛细管电泳在核酸适配体研究及核酸适配体筛选中的应用[J]. 屈锋,刘允,任肖敏,赵新颖,张经华.  化学进展. 2009(Z2)
[3]毛细管电泳技术及其在环境分析领域中的应用[J]. 戴婷婷,荚荣,郑志侠.  安徽农业科学. 2008(06)
[4]毛细管电泳在生物分析化学上的应用及进展[J]. 董捷.  山东环境. 1998(03)



本文编号：2982497