大鼠脊髓背角Ⅱ层表达T型钙电流的神经元的形态及电生理特性研究
发布时间：2021-03-09 14:25
目的:T型钙通道,也称为低电压激活钙通道,是电压依赖型钙离子通道家族中的成员,有三种亚型:Cav3.1、Cav3.2和Cav3.3,广泛分布于中枢及外周神经系统,其中就包括脊髓背角II层,即胶状质（Substantia gelatinosa,SG）区。SG区是伤害性刺激向中枢传递的初级门户,主要由兴奋性和抑制性中间神经元组成,与疼痛信息的传递与整合密切相关。为了进一步探讨T型钙通道在痛信息传递中的作用,本实验研究了3-5周龄幼年SD（Sprague-Dawley）大鼠脊髓背角SG区表达T型钙电流的神经元的形态及电生理特性,以期为揭示T型钙通道在疼痛传导通路中的作用及机制提供理论基础。方法:首先,选取幼年雄性SD大鼠,制作450μm的脊髓腰骶膨大部位（L1-S3）横切片,使用全细胞膜片钳技术记录SG神经元的电生理特性:包括主动膜特性、被动膜特性以及T型钙电流;并运用T型钙通道阻断剂氯化镍、TTA-A2等药物,研究这些药物对T型钙电流阻断的药理学特点,如药物的起效时间、作用高峰时间、可逆性、剂量依赖曲线及半抑制有效浓度(IC50)等。其次,选取同上SD大鼠,制备300...
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
脊髓切片的制备
图 3.1 大鼠脊髓背角 SG 神经元上 T 型钙电流的表达。A：电流钳模式下，记录 SG 神经元内向电流的刺激方案及代表图：Control（Aa），0.5 μM TTX（Ab），0.5 μM TTX + 1 mM NiCl2（Ac），纯化相减（Ad）。B：从 A 图中所得的电流密度随电压变化图。C：电流曲线代表图 Control（Ca），0.5 μM TTX（Cb），0.5 μM TTX + 40 μM TTA-A2（Cc），纯化相减（Cd）。D：从 C 图所得的电流密度随电压变化图。3.2 T 型钙通道阻断剂对 T 型钙电流的影响我们接下来进一步探究 NiCl2和 TTA-A2 对 T 型钙电流的抑制效能。如图 3.2A-B 所示，使用 0.2 mM NiCl2使得 T 型钙电流的幅值下降至原来的 29.6 ± 4.6%（41.6 ± 8.6 pA；P < 0.001；n = 8 cells；N = 5 SD rats；图 3.2 C），到达抑制峰值的时间大概需要 15-20 min。这种阻断效能可在人工脑脊液中灌流 30 min 后恢复至原来的 89.6 ± 3.9%（36.8 ± 7.4 pA；P = 0.063；n = 8 cells；N = 5 SD rats；图 3.2 C）。使用 40 μM TTA-A2 使 T 型钙电流幅值降至原来的 12.1 ± 4.7%（153.9± 68.1 pA；P = 0.004；n = 3 cells；N=2 SD rats；图 3.2 D-F）。经过人工脑脊液
15图3.2 SG神经元上T型钙电流的药理学特性。A：T型钙电流代表图Control，0.2 mM NiCl2，Washout 及重叠曲线。T 型钙电流的激活是通过每 10 s 一次的脉冲刺激：从钳制电位-110 mV（500 ms）阶跃至测试电位-50 mV（200 ms）。B：NiCl2阻断 T 型钙电流的时间依赖曲线。C：NiCl2对 T 型钙电流的阻断效率柱状图。D：T 型钙电流代表图 Control，40 μM TTA-A2，Washout 及重叠曲线。E：TTA-A2 阻断 T 型钙电流的时间依赖曲线。F：TTA-A2 对 T 型钙电流的阻断效率柱状图。G-H：NiCl2和TTA-A2对T型钙电流的浓度依赖曲线。*代表p < 0.05，**代表 p < 0.01，***代表 p < 0.001，n.s.表示无统计学差异。3.3 SG 神经元上 T 型钙电流的电生理特性为明确 T 型钙电流对 SG 神经元的调控作用，接下来我们首先研究 T 型钙电流的电生理特性。T 型钙电流的幅值大小从 6.1 pA 到 415.4 pA 不等（n = 178cells；N = 60 SD rats），平均幅值为 84.8 ± 5.3 pA（图 3.3A）。电流大小在< 50 pA，
【参考文献】：
期刊论文
[1]脊髓背角胶状质神经元形态与电生理学特性的研究进展[J]. 刘娜娜,王欣萌,彭斯聪,柳涛. 生理科学进展. 2016(06)
本文编号：3072997
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
脊髓切片的制备
图 3.1 大鼠脊髓背角 SG 神经元上 T 型钙电流的表达。A：电流钳模式下，记录 SG 神经元内向电流的刺激方案及代表图：Control（Aa），0.5 μM TTX（Ab），0.5 μM TTX + 1 mM NiCl2（Ac），纯化相减（Ad）。B：从 A 图中所得的电流密度随电压变化图。C：电流曲线代表图 Control（Ca），0.5 μM TTX（Cb），0.5 μM TTX + 40 μM TTA-A2（Cc），纯化相减（Cd）。D：从 C 图所得的电流密度随电压变化图。3.2 T 型钙通道阻断剂对 T 型钙电流的影响我们接下来进一步探究 NiCl2和 TTA-A2 对 T 型钙电流的抑制效能。如图 3.2A-B 所示，使用 0.2 mM NiCl2使得 T 型钙电流的幅值下降至原来的 29.6 ± 4.6%（41.6 ± 8.6 pA；P < 0.001；n = 8 cells；N = 5 SD rats；图 3.2 C），到达抑制峰值的时间大概需要 15-20 min。这种阻断效能可在人工脑脊液中灌流 30 min 后恢复至原来的 89.6 ± 3.9%（36.8 ± 7.4 pA；P = 0.063；n = 8 cells；N = 5 SD rats；图 3.2 C）。使用 40 μM TTA-A2 使 T 型钙电流幅值降至原来的 12.1 ± 4.7%（153.9± 68.1 pA；P = 0.004；n = 3 cells；N=2 SD rats；图 3.2 D-F）。经过人工脑脊液
15图3.2 SG神经元上T型钙电流的药理学特性。A：T型钙电流代表图Control，0.2 mM NiCl2，Washout 及重叠曲线。T 型钙电流的激活是通过每 10 s 一次的脉冲刺激：从钳制电位-110 mV（500 ms）阶跃至测试电位-50 mV（200 ms）。B：NiCl2阻断 T 型钙电流的时间依赖曲线。C：NiCl2对 T 型钙电流的阻断效率柱状图。D：T 型钙电流代表图 Control，40 μM TTA-A2，Washout 及重叠曲线。E：TTA-A2 阻断 T 型钙电流的时间依赖曲线。F：TTA-A2 对 T 型钙电流的阻断效率柱状图。G-H：NiCl2和TTA-A2对T型钙电流的浓度依赖曲线。*代表p < 0.05，**代表 p < 0.01，***代表 p < 0.001，n.s.表示无统计学差异。3.3 SG 神经元上 T 型钙电流的电生理特性为明确 T 型钙电流对 SG 神经元的调控作用，接下来我们首先研究 T 型钙电流的电生理特性。T 型钙电流的幅值大小从 6.1 pA 到 415.4 pA 不等（n = 178cells；N = 60 SD rats），平均幅值为 84.8 ± 5.3 pA（图 3.3A）。电流大小在< 50 pA，
【参考文献】：
期刊论文
[1]脊髓背角胶状质神经元形态与电生理学特性的研究进展[J]. 刘娜娜,王欣萌,彭斯聪,柳涛. 生理科学进展. 2016(06)
本文编号：3072997
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