生殖道解脲支原体荧光定量PCR检测方法的建立与应用
发布时间：2021-04-13 17:53
解脲支原体是一种介于细菌与病毒之间的、能独立生活的最小原核细胞型微生物,同时也是一种易引起生殖道、泌尿道感染的病原微生物。对于男性会引起前列腺炎、尿道炎、肾盂肾炎等;对于女性会引起阴道炎、子宫颈炎、盆腔炎等生殖腔道的炎性反应,是造成不孕不育、流产的病原体之一。当前常用于检测解脲支原体的培养法和血清学方法灵敏度低、特异性差、假阳性高且耗时费力,然而,荧光定量PCR技术（FQ-PCR）因具有灵敏、快速、精确定量的优点,开始广泛应用在临床微生物检测方面。荧光定量PCR（FQ-PCR）检测技术融合了普通PCR高灵敏性、DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精确定量等优点,能达到检测值更为精确、特异性更加灵敏、封闭式操作污染途径少的优点。它通过直接检测PCR反应过程中荧光信号的变化,以获取特定区段扩增产物定量的结果,不需要进行实验后处理或电泳检测,实现完全封闭操作,解决了普通PCR技术的诸多难题。目的:本研究建立及优化荧光定量PCR检测解脲支原体的反应体系,为临床微生物检测提供新的技术手段。方法:1.通过比对NCBI BLAST中已有的解脲脲原体和微小脲原体UreB基因序列,选择高度保守的区域设计引...
【文章来源】：广州医科大学广东省
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
引物和探针浓度的确定-Uu的扩增注：图5中相同颜色曲线代表同一种浓度，红→10-1/μL，黄→10-2/μL，草绿→10-3/μL，蓝绿→10-4/μL；同一种颜色中：上→引物300nmol/L，探针150nmol/L.
3.1.4 荧光定量 PCR 方法的检测限确定和特异性分析Uu（serover 10）、Up（serover 3）标准菌株DNA原液浓度分别经分光光度计测定为200 ng/μL和250 ng/μL。荧光定量PCR方法的检测限确定结果见图7和图8，Uu的10-1～10-5均有明显的扩增曲线，10-6无明显的扩增曲线，因此Uu的检测限为0.01 ng；Up的10-1～10-5均有明显的扩增曲线，10-6无明显的扩增曲线，因此Uu的检测限为0.0125 ng。经多次重复结果稳定。荧光定量PCR方法的特异性确定结果见图9，以临床分离株白色念珠菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、粪肠球菌、加德纳菌、乳酸杆菌、人型支原体、人基因组的DNA和阴性对照均无扩增曲线，Uu和Up
3.1.4 荧光定量 PCR 方法的检测限确定和特异性分析Uu（serover 10）、Up（serover 3）标准菌株DNA原液浓度分别经分光光度计测定为200 ng/μL和250 ng/μL。荧光定量PCR方法的检测限确定结果见图7和图8，Uu的10-1～10-5均有明显的扩增曲线，10-6无明显的扩增曲线，因此Uu的检测限为0.01 ng；Up的10-1～10-5均有明显的扩增曲线，10-6无明显的扩增曲线，因此Uu的检测限为0.0125 ng。经多次重复结果稳定。荧光定量PCR方法的特异性确定结果见图9，以临床分离株白色念珠菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、粪肠球菌、加德纳菌、乳酸杆菌、人型支原体、人基因组的DNA和阴性对照均无扩增曲线，Uu和Up阳性?
【参考文献】：
期刊论文
[1]生殖道解脲脲原体和衣原体感染与不孕症的相关性分析[J]. 王婉萍,沈玲珑,张甦,孙翠翔,叶旭萍. 中华医院感染学杂志. 2017(13)
[2]解脲支原体感染对男女不育不孕的临床影响研究[J]. 白玮,郝娜,连建华,田飒,任杉杉,王玲. 中国性科学. 2017(05)
[3]泌尿生殖道解脲支原体和人型支原体感染情况及药敏结果分析[J]. 周景欣. 中国微生态学杂志. 2017(03)
[4]女性生殖道解脲支原体感染状况及其分群价值的研究[J]. 钱迎芬. 中国实验诊断学. 2016(10)
[5]解脲支原体感染对不育男性精液质量及生育能力的影响[J]. 刘伯龙,王娟花,唐正,张益康,秦松林. 中南医学科学杂志. 2016(04)
[6]微小脲原体相对定量方法的建立及临床应用[J]. 赵缜,刘璐,赵芳,曹国君,黄燕群,季育华. 检验医学. 2015(09)
[7]钩栗ISSR-PCR反应体系的建立与优化[J]. 田艳伶,李志辉,杨模华,张斌. 中南林业科技大学学报. 2015(02)
[8]血清1型鸭甲型肝炎病毒实时定量PCR检测方法的建立与初步应用[J]. 孙庆歌,李晶梅,朱薇,肖爱芳,赖志,薛霜,高俊锋,马慧慧,祝春花,谢红玲. 中国兽药杂志. 2014(12)
[9]菠萝凋萎相关病毒-1实时荧光定量RT-PCR检测体系的建立与应用[J]. 胡加谊,罗志文,李向宏,范鸿雁,周朋,章绍延,张治礼,刘志昕,何凡. 植物保护. 2014(06)
[10]改进茎环引物RT-PCR法实时定量检测microRNA[J]. 薛慧慧,马骁骁,朱长保,晁天柱,肖君华,周宇荀. 现代生物医学进展. 2014(28)
博士论文
[1]二聚体突变引物定量PCR技术的研发及其临床应用[D]. 夏乾峰.重庆医科大学 2011
硕士论文
[1]重要致病性弧菌TaqMan实时PCR检测方法的建立[D]. 王海波.山东大学 2009
本文编号：3135749
【文章来源】：广州医科大学广东省
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
引物和探针浓度的确定-Uu的扩增注：图5中相同颜色曲线代表同一种浓度，红→10-1/μL，黄→10-2/μL，草绿→10-3/μL，蓝绿→10-4/μL；同一种颜色中：上→引物300nmol/L，探针150nmol/L.
3.1.4 荧光定量 PCR 方法的检测限确定和特异性分析Uu（serover 10）、Up（serover 3）标准菌株DNA原液浓度分别经分光光度计测定为200 ng/μL和250 ng/μL。荧光定量PCR方法的检测限确定结果见图7和图8，Uu的10-1～10-5均有明显的扩增曲线，10-6无明显的扩增曲线，因此Uu的检测限为0.01 ng；Up的10-1～10-5均有明显的扩增曲线，10-6无明显的扩增曲线，因此Uu的检测限为0.0125 ng。经多次重复结果稳定。荧光定量PCR方法的特异性确定结果见图9，以临床分离株白色念珠菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、粪肠球菌、加德纳菌、乳酸杆菌、人型支原体、人基因组的DNA和阴性对照均无扩增曲线，Uu和Up
3.1.4 荧光定量 PCR 方法的检测限确定和特异性分析Uu（serover 10）、Up（serover 3）标准菌株DNA原液浓度分别经分光光度计测定为200 ng/μL和250 ng/μL。荧光定量PCR方法的检测限确定结果见图7和图8，Uu的10-1～10-5均有明显的扩增曲线，10-6无明显的扩增曲线，因此Uu的检测限为0.01 ng；Up的10-1～10-5均有明显的扩增曲线，10-6无明显的扩增曲线，因此Uu的检测限为0.0125 ng。经多次重复结果稳定。荧光定量PCR方法的特异性确定结果见图9，以临床分离株白色念珠菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、粪肠球菌、加德纳菌、乳酸杆菌、人型支原体、人基因组的DNA和阴性对照均无扩增曲线，Uu和Up阳性?
【参考文献】：
期刊论文
[1]生殖道解脲脲原体和衣原体感染与不孕症的相关性分析[J]. 王婉萍,沈玲珑,张甦,孙翠翔,叶旭萍. 中华医院感染学杂志. 2017(13)
[2]解脲支原体感染对男女不育不孕的临床影响研究[J]. 白玮,郝娜,连建华,田飒,任杉杉,王玲. 中国性科学. 2017(05)
[3]泌尿生殖道解脲支原体和人型支原体感染情况及药敏结果分析[J]. 周景欣. 中国微生态学杂志. 2017(03)
[4]女性生殖道解脲支原体感染状况及其分群价值的研究[J]. 钱迎芬. 中国实验诊断学. 2016(10)
[5]解脲支原体感染对不育男性精液质量及生育能力的影响[J]. 刘伯龙,王娟花,唐正,张益康,秦松林. 中南医学科学杂志. 2016(04)
[6]微小脲原体相对定量方法的建立及临床应用[J]. 赵缜,刘璐,赵芳,曹国君,黄燕群,季育华. 检验医学. 2015(09)
[7]钩栗ISSR-PCR反应体系的建立与优化[J]. 田艳伶,李志辉,杨模华,张斌. 中南林业科技大学学报. 2015(02)
[8]血清1型鸭甲型肝炎病毒实时定量PCR检测方法的建立与初步应用[J]. 孙庆歌,李晶梅,朱薇,肖爱芳,赖志,薛霜,高俊锋,马慧慧,祝春花,谢红玲. 中国兽药杂志. 2014(12)
[9]菠萝凋萎相关病毒-1实时荧光定量RT-PCR检测体系的建立与应用[J]. 胡加谊,罗志文,李向宏,范鸿雁,周朋,章绍延,张治礼,刘志昕,何凡. 植物保护. 2014(06)
[10]改进茎环引物RT-PCR法实时定量检测microRNA[J]. 薛慧慧,马骁骁,朱长保,晁天柱,肖君华,周宇荀. 现代生物医学进展. 2014(28)
博士论文
[1]二聚体突变引物定量PCR技术的研发及其临床应用[D]. 夏乾峰.重庆医科大学 2011
硕士论文
[1]重要致病性弧菌TaqMan实时PCR检测方法的建立[D]. 王海波.山东大学 2009
本文编号：3135749
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