脓毒症时中性粒细胞过度浸润的机制研究及CORM-2的干预作用

发布时间：2021-04-20 23:21

　　研究背景脓毒症被定义为对感染的系统性炎症反应综合征,严重时会伴随器官功能的障碍,如组织低灌注、缺氧,乳酸血症,少尿,脑功能改变等。尽管运用抗生素治疗,充足的液体复苏,仪器器官支持,脓毒症的死亡率仍然很高,大约为35%。细菌是脓毒症的主要感染源,脓毒症病人通常都会发生肺功能障碍,心血管功能失调及肾脏功能障碍。中性粒细胞是机体免疫系统的第一道防线,在抵御细菌感染中具有重要作用。然而,当中性粒细胞过度激活时也会导致机体组织的损伤。通常感染时机体为了更有效的增强自我防御,需要中性粒细胞高效的到达目标感染部位。事实上,机体在正常情况下在此过程中是可以通过合理的对诱导刺激发生反应,并在短时间内产生大量的中性粒细胞并快速、有效的向炎症区域移动的。为了完成这一高效的反应,中性粒细胞需要对细胞外的化学梯度识别,并向更高浓度区域迁移。在此过程中,趋化物在空间时间上对中性粒细胞的迁移起调节作用。总的来说,中性粒细胞对这些趋化信号是以一种层级的方式反应的,换句话说就是对某些趋化信号具有优先作用。依据这个概念,趋化物可以进一步分成两大类:“end target”（终末靶向趋化物）,如N-frmylated pe... 

【文章来源】：江苏大学江苏省

【文章页数】：121 页

【学位级别】：博士

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摘要
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第一章 绪论
    1.1 中性粒细胞对感染的控制
        1.1.1 中性粒细胞产生
        1.1.2 中性粒细胞从骨髓中释放
        1.1.3 中性粒细胞向感染部位迁移
        1.1.4 中性粒细胞对病原菌的杀伤
    1.2 脓毒症时中性粒细胞发生的迁移损伤
        1.2.1 中性粒细胞的趋化
        1.2.2 中性粒细胞的趋化的调节
        1.2.3 脓毒症时中性粒细胞迁移损伤
    1.3 中性粒细胞诱导的器官损伤
        1.3.1 系统炎症反应与器官损伤
        1.3.2 中性粒细胞趋化作用与器官功能的损伤
        1.3.3 中性粒细胞NETs与器官损伤
    1.4 CORM-2对脓毒症的保护作用
        1.4.1 CO是一种细胞保护分子
        1.4.2 CORMs的发展
        1.4.3 CORMs临床应用及CORM-2对脓毒症的保护作用
    1.5 本研究的目的、方法、实验设计和意义
        1.5.1 研究目的
        1.5.2 研究方法
        1.5.3 实验设计
        1.5.4 研究意义
第二章 CORM-2改善脓毒症时重要脏器炎症损伤及中性粒细胞过度浸润
    2.1 引言
    2.2 实验仪器与耗材、试剂
        2.2.1 实验仪器与耗材
        2.2.2 实验试剂
    2.3 实验方法
        2.3.1 小鼠处理
        2.3.2 小鼠骨髓中性粒细胞提取
        2.3.3 生存率分析
        2.3.4 小鼠肝脏、肺脏病理损伤及中性粒细胞浸润情况
        2.3.5 小鼠肝脏、肺脏炎症反应的评价
        2.3.6 中性粒细胞（小鼠）琼脂糖下趋化实验研究
        2.3.7 中性粒细胞（小鼠）吞噬功能检测研究
        2.3.8 统计分析
    2.4 实验结果
        2.4.1 CORM-2干预可以提高LPS诱导的脓毒症小鼠生存率
        2.4.2 CORM-2改善脓毒症小鼠肝肺炎症反应
        2.4.3 CORM-2改善脓毒症小鼠中性粒细胞的过度浸润
        2.4.4 CORM-2改善LPS刺激的中性粒细胞趋化
        2.4.5 CORM-2对LPS刺激的中性粒细胞的吞噬功能的影响
    2.5 讨论
第三章 中性粒细胞趋化因子受体FPR1介导LPS刺激的中性粒细胞趋化增强
    3.1 引言
    3.2 实验仪器和耗材、试剂
        3.2.1 实验仪器和耗材
        3.2.2 实验试剂
    3.3 实验方法
        3.3.1 中性粒细胞的趋化检测
        3.3.2 中性粒细胞的提取
        3.3.3 基因芯片分析
        3.3.4 RT-PCR
        3.3.5 磷酸化-MAPK蛋白芯片
        3.3.6 Westernblotting
        3.3.7 膜趋化受体表达
        3.3.8 激光共聚焦显微镜
        3.3.9 统计分析
    3.4 实验结果
        3.4.1 LPS促进中性粒细胞趋化
        3.4.2 FMLP诱导的趋化信号覆盖其他的趋化信号：层级趋化
        3.4.3 LPS促进中性粒细胞趋化：层级趋化
        3.4.4 中性粒细胞全基因组分析
        3.4.5 基因芯片分析LPS对中性粒细胞趋化受体表达的影响
        3.4.6 LPS刺激的中性粒细胞MAPKs通路的活化
        3.4.7 p38通过对LPS刺激的中性粒细胞的趋化受体表达调控层级趋化
        3.4.8 p38通过对LPS刺激的中性粒细胞的趋化受体分布调控层级趋化
        3.4.9 LPS通过活化p38促进中性粒细胞层级趋化
    3.5 讨论
第四章 CORM-2通过促进FPR1内化抑制LPS刺激的中性粒细胞趋化增强
    4.1 引言
    4.2 实验仪器和耗材、试剂
        4.2.1 实验仪器和耗材
        4.2.2 实验试剂
    4.3 实验方法
        4.3.1 相位显微镜技术
        4.3.2 中性粒细胞凋亡检测
        4.3.3 Westernblotting
        4.3.4 激光共聚焦显微镜
        4.3.5 琼脂糖趋化实验
        4.3.6 统计分析
    4.4 实验结果
        4.4.1 CORM-2对LPS刺激的中性粒细胞相位的影响
        4.4.2 CORM-2对LPS刺激的中性粒细胞活力的影响
        4.4.3 CORM-2对LPS刺激的中性粒细胞FPR1表达的影响
        4.4.4 CORM-2对LPS刺激的中性粒细胞FPR1分布的影响
        4.4.5 CORM-2对LPS刺激中性粒细胞TLR4表达的影响
        4.4.6 CORM-2通过GRK2对LPS刺激的中性粒细胞趋化的影响
        4.4.7 CORM-2通过p38对LPS刺激的中性粒细胞趋化的影响
        4.4.8 CORM-2通过p38对LPS刺激的中性粒细胞FPR1的影响
    4.5 讨论
结论
参考文献
致谢
在学期间发表学术论文及其他科研成果



本文编号：3150588