羧基磁珠捕获血清外泌体及双抗体夹心法在检测外泌体蛋白中的应用

发布时间：2021-04-21 19:39

　　目的1.通过应用羧基磁珠与外泌体表面蛋白相应的抗体偶联,运用免疫法进行血清外泌体的捕获,建立一种利用免疫磁珠捕获外泌体的方法。2.通过制备的免疫磁珠对外泌体进行捕获后,以磁珠做为固相载体,以外泌体类似为抗原,构建双抗体夹心体系,探索双抗体夹心法在制备的免疫磁珠上是否适用。方法1.免疫磁珠的制备:筛选免疫磁珠制备的工艺和制备中所需的最适抗体体积,运用酶联免疫吸附试验检测羧基一步法和羧基两步法两种工艺,以及抗体（浓度:1μg/μl）体积为10μl,15μl和20μl条件下制备的免疫磁珠的效率,检测OD值,实验数据重复三次,取其均数,数据以x描述,两组实验空白对照组均为未偶联任何抗体的空白磁珠。实验中所用抗体为单克隆鼠抗CD-63。2.免疫磁珠法捕获外泌体:收集河南省人民医院健康体检者血清20例,用制备的免疫磁珠根据抗原抗体特异性吸附原理捕获血清中的外泌体。设置对照组为经过同样操作步骤,偶联外泌体不相关抗体的磁珠,选用抗体为乙肝表面抗体。3.对捕获的结果进行鉴定:透射电子显微镜观察外泌体的形态和大小;Western blot分析外泌体的标志蛋白,Western blot所分析的蛋白为跨膜蛋白... 

【文章来源】：河南中医药大学河南省

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
前言
材料与方法
    1.研究对象
    2.实验材料
    3.实验方法
结果
    1.磁珠偶联工艺筛选结果
    2.磁珠偶联抗体浓度筛选结果
    3.磁珠提取外泌体结果
    4.验证双抗体夹心法是否适用结果
    5
    6
    7
    8
    9
讨论
结论
致谢
参考文献
附录1 文献综述
    参考文献
附录2


【参考文献】：
期刊论文
[1]结直肠癌患者血清外泌体代替肿瘤组织检测K-Ras基因突变的研究[J]. 崔琮,靳杨,谭招丽,王岩,王友亮,徐建明.  临床肿瘤学杂志. 2017(05)



本文编号：3152366