基于PCR核酸修饰技术结合核酸试纸条的鼠伤寒沙门氏菌检测方法研究
发布时间：2021-08-27 18:45
沙门氏菌作为一种常见的人畜共患的革兰氏阴性致病菌,高频率地在全世界多个地区爆发。鼠伤寒沙门氏菌作为致病率最高的病原菌之一,常通过饮食进入体内,与胃肠道中的微生物菌落竞争营养以及生活空间,从而打破土著微生物稳定的生存模式,引起一系列的沙门氏菌中毒症状。为了降低鼠伤寒沙门氏菌感染病的爆发率,减少各国的经济损失,本试验以鼠伤寒沙门氏菌的16S r DNA/r RNA为研究对象,结合核酸修饰技术和核酸检测试纸条（Nucleic Acid Strip,NAS）实现鼠伤寒沙门氏菌的便携式和可视化检测。研究内容如下:PCR核酸修饰技术结合核酸检测试纸条对鼠伤寒沙门氏菌16S r DNA的可视化检测。生物素-d UTP（Biotin-d UTP）将“Natural d NTP”转换为“Biotin d NTP”,以沙门氏菌16S r DNA为模板,将生物素-三磷酸碱基脱氧核苷酸（Biotin d NTP）掺入DNA链中,使每个双链DNA分子携带多个生物素分子。除此之外,上游引物的5’修饰了羧基荧光素（FAM）,因此,产生的每条双链DNA都携带一个分子的FAM且双链上携带多个生物素分子,使用NAS进行可...
【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
LAMP原理图（引用）
图 1-1 LAMP 原理图（引用）Fig1-1 Schematic illustration of LAMP (Reference)增（hybridization chain reactions，HCR）是一种核酸74]首次提出并设计了一对具有颈环结构的探针 Hairpin 异性启动发夹结构探针 Hairpin 1 和 Hairpin 2，并不断组g Chen 等[76]利用杂交链式等温扩增技术与电化学方法 pM。
科学研究的进步，专家根据酶与脱氧核苷三磷酸的相互作用，将研究需要官能团直接引入核酸中，省去了商业化核酸修饰的时间和费用，使核酸修种简单、方便的生物学工具而应用于现代生物分子学研究中[78]。官能团或者生物受体的 dNTP 借助酶促聚合作用，将修饰物引入双链 DN的修饰物有氨基、巯基[80]、叠氮基团[81]和生物素[82]等。2015 年 Dajie Lin生物素的 dATP 与纳米磁珠联用，对待检测蛋白进行信号放大，借助电化学大的核酸产物进行检测，经过验证发现此技术对甲胎蛋白的检测限为 2016 年 Xiaomei Ren 等人[84]利用外切酶的消化和链霉亲和素磁珠的分了 N3-dUTP 和 BCN 染料对 DNA 的双色荧光标记，此方法作为一种简色法，在生物研究领域存在潜在的发展前景。2017 年，Mayreli Ortiz 等[85氧酸盐（Deoxynucleotide Triphosphates, POM）的 dNTP 对耶尔森氏菌ia pestis）特异性 DNA 进行信号扩增，并结合电化学生物器完成生物检测，OM 是一种热稳定、灵敏和酶兼容的氧化还原分子。
【参考文献】：
期刊论文
[1]以聚合酶链式反应为基础的分子生物学方法快速鉴定万古霉素耐药肠球菌的研究现状[J]. 何渊慧,阮亘杰,郑波. 中国临床药理学杂志. 2017(23)
[2]Some pathogenic characters of paratyphoid Salmonella enterica strains isolated from poultry[J]. Fabrizio Bertelloni,Giovanni Tosi,Paola Massi,Laura Fiorentini,Maria Parigi,Domenico Cerri,Valentina Virginia Ebani. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2017(12)
[3]一种基于液相基因芯片技术对甲型和乙型流感病毒分型检测方法的建立[J]. 陈锦龙,吕刚,张优,符瑞佳,尹飞飞. 分子诊断与治疗杂志. 2017(05)
[4]酶联免疫吸附测定中固相化方法概述[J]. 毛依阳,袁慧慧. 微生物学免疫学进展. 2017(05)
[5]基因测序技术在细菌性传染病监测中的应用[J]. 张淳,张媛媛. 中国医学装备. 2017(07)
[6]免疫学检测中抗体固定化方法的研究现状[J]. 刘爱平,申文浩,王小红,李诚. 江苏农业学报. 2017(03)
[7]肠出血性大肠埃希菌O157免疫磁珠的制备[J]. 梁冰,张雅洁,纪雪,祝令伟,郭学军,刘彦晶,刘军,周伟,李丽红,冯书章,孙洋. 中国生物制品学杂志. 2017(03)
[8]免疫层析技术在食源性病原菌检测中的应用展望[J]. 杨娟,郭铮蕾,畅晓晖,杨向莹,许美玲,尚士进,饶红,张锡全,陈广全,张捷. 食品安全质量检测学报. 2016(09)
[9]基因芯片方法检测耐异烟肼结核分枝杆菌准确性的Meta分析[J]. 舒丽红,丁显平. 检验医学与临床. 2016(15)
[10]电化学传感技术在羟基多环芳烃检测中的应用[J]. 李皖豫,缪文彬,沈晓芳,蒋伟,庞月红. 食品安全质量检测学报. 2016(01)
博士论文
[1]沙门氏菌mcr-1基因传播机制与食源性耐药致病菌检测芯片研究[D]. 崔明全.中国农业大学 2017
[2]高特异性碳纳米生物传感器快速检测沙门氏菌的研究[D]. 宁毅.湖南师范大学 2014
硕士论文
[1]基于纳米金标记的沙门氏菌检测方法研究[D]. 宋靓婧.江南大学 2014
本文编号：3366893
【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
LAMP原理图（引用）
图 1-1 LAMP 原理图（引用）Fig1-1 Schematic illustration of LAMP (Reference)增（hybridization chain reactions，HCR）是一种核酸74]首次提出并设计了一对具有颈环结构的探针 Hairpin 异性启动发夹结构探针 Hairpin 1 和 Hairpin 2，并不断组g Chen 等[76]利用杂交链式等温扩增技术与电化学方法 pM。
科学研究的进步，专家根据酶与脱氧核苷三磷酸的相互作用，将研究需要官能团直接引入核酸中，省去了商业化核酸修饰的时间和费用，使核酸修种简单、方便的生物学工具而应用于现代生物分子学研究中[78]。官能团或者生物受体的 dNTP 借助酶促聚合作用，将修饰物引入双链 DN的修饰物有氨基、巯基[80]、叠氮基团[81]和生物素[82]等。2015 年 Dajie Lin生物素的 dATP 与纳米磁珠联用，对待检测蛋白进行信号放大，借助电化学大的核酸产物进行检测，经过验证发现此技术对甲胎蛋白的检测限为 2016 年 Xiaomei Ren 等人[84]利用外切酶的消化和链霉亲和素磁珠的分了 N3-dUTP 和 BCN 染料对 DNA 的双色荧光标记，此方法作为一种简色法，在生物研究领域存在潜在的发展前景。2017 年，Mayreli Ortiz 等[85氧酸盐（Deoxynucleotide Triphosphates, POM）的 dNTP 对耶尔森氏菌ia pestis）特异性 DNA 进行信号扩增，并结合电化学生物器完成生物检测，OM 是一种热稳定、灵敏和酶兼容的氧化还原分子。
【参考文献】：
期刊论文
[1]以聚合酶链式反应为基础的分子生物学方法快速鉴定万古霉素耐药肠球菌的研究现状[J]. 何渊慧,阮亘杰,郑波. 中国临床药理学杂志. 2017(23)
[2]Some pathogenic characters of paratyphoid Salmonella enterica strains isolated from poultry[J]. Fabrizio Bertelloni,Giovanni Tosi,Paola Massi,Laura Fiorentini,Maria Parigi,Domenico Cerri,Valentina Virginia Ebani. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2017(12)
[3]一种基于液相基因芯片技术对甲型和乙型流感病毒分型检测方法的建立[J]. 陈锦龙,吕刚,张优,符瑞佳,尹飞飞. 分子诊断与治疗杂志. 2017(05)
[4]酶联免疫吸附测定中固相化方法概述[J]. 毛依阳,袁慧慧. 微生物学免疫学进展. 2017(05)
[5]基因测序技术在细菌性传染病监测中的应用[J]. 张淳,张媛媛. 中国医学装备. 2017(07)
[6]免疫学检测中抗体固定化方法的研究现状[J]. 刘爱平,申文浩,王小红,李诚. 江苏农业学报. 2017(03)
[7]肠出血性大肠埃希菌O157免疫磁珠的制备[J]. 梁冰,张雅洁,纪雪,祝令伟,郭学军,刘彦晶,刘军,周伟,李丽红,冯书章,孙洋. 中国生物制品学杂志. 2017(03)
[8]免疫层析技术在食源性病原菌检测中的应用展望[J]. 杨娟,郭铮蕾,畅晓晖,杨向莹,许美玲,尚士进,饶红,张锡全,陈广全,张捷. 食品安全质量检测学报. 2016(09)
[9]基因芯片方法检测耐异烟肼结核分枝杆菌准确性的Meta分析[J]. 舒丽红,丁显平. 检验医学与临床. 2016(15)
[10]电化学传感技术在羟基多环芳烃检测中的应用[J]. 李皖豫,缪文彬,沈晓芳,蒋伟,庞月红. 食品安全质量检测学报. 2016(01)
博士论文
[1]沙门氏菌mcr-1基因传播机制与食源性耐药致病菌检测芯片研究[D]. 崔明全.中国农业大学 2017
[2]高特异性碳纳米生物传感器快速检测沙门氏菌的研究[D]. 宁毅.湖南师范大学 2014
硕士论文
[1]基于纳米金标记的沙门氏菌检测方法研究[D]. 宋靓婧.江南大学 2014
本文编号：3366893
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