脓毒症时机体中性粒细胞功能改变机制的初步研究

发布时间：2021-12-19 07:07

　　【研究目的】1.研究烧伤脓毒症患者严重感染时外周血中性粒细胞功能的变化,包括中性粒的细胞数量,趋化功能,以及凋亡的改变,初步揭示脓毒症患者在严重感染期中性粒细胞的表型变化。2.建立CLP脓毒症小鼠模型,体外LPS刺激小鼠骨髓中性粒细胞模型,对CLP小鼠模型骨髓中性粒细胞的趋化、凋亡及表型进行检测研究,LPS刺激骨髓中性粒细胞体外细胞模型,使用P38抑制剂刺激中性粒细胞,初步揭示P38 MAPK信号通路对中性粒细胞表型的调节作用,为中性粒细胞在脓毒症的发病机制中的作用提供一定的理论依据,为临床脓毒症的治疗提供新的思路。【研究方法】1.临床试验部分:收集5例临床烧伤脓毒症患者感染期血液样本,同期收集5例健康青年志愿者作为对照组,通过Ficoll密度梯度离心法分离然后提纯中性粒细胞,通过台盼蓝染色观察中性粒细胞活性;瑞氏染色观察细胞形态以及CD66b染色鉴定其纯度;通过琼脂糖凝胶趋化实验检测趋化距离,流式细胞仪检测中性粒细胞的凋亡比例,同时检测中性粒细胞表面分子PD-L1（CD274）改变,行相关性分析,并对上述数据统计分析。2.动物模型部分:取20只雄性C57/B6小鼠按随机原则分为假手术... 

【文章来源】：江苏大学江苏省

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

3.1Ficoll密度梯度离心法

接着在室温下避光孵育 15min，加入等体积 100μL4%的多聚甲定 20min，上机前再加入 200μLPBS，最后流式细胞仪检测外纯度。周血中性粒细胞琼脂糖趋化实验性粒细胞可以在某些趋化物的刺激下发生定向的迁移运动的特较常用的外源性趋化因子（fMLP），通过 fMLP 的作用对成人的趋化功能进行检测。我们课题组前期的实验结果已证实40,4实验中，fMLP 能够引起外周血中性粒细胞发生迁移的l/L，因此，在本实验中我们选取最佳浓度的 fLMP 来诱导中性选用 fLMP 的刺激浓度为 0.1μmol/L。为趋化模型：

成人中性粒细胞的瑞氏染色（100×he Wright’s staining of PMNs in huma的活力细胞的活力：如果未与台盼蓝胞膜完整，可认为是活细胞；，观察细胞可呈现蓝色，说明 3 次，具体结果见表 2.3.2。 成人外周血中性粒细胞的活力活细胞数×107/mL）细胞的总数（×107/mL）0.73 0.75 0.71 0.72 0.72 0.74


本文编号：3543983