一种抗突变的逆转录环介导等温扩增（RT-LAMP）方法及其在虫媒病检测上的应用

发布时间：2022-12-23 03:18

　　登革热在全球范围分布广泛,是传播最快的虫媒病之一,对公共医疗卫生造成了极大的负担。而超过半数的登革热患者表现为普通发热的症状或者无症状,所以仅仅通过临床症状上来判断是否被登革病毒（Dengue Virus,DENV）感染有很大难度,因此建立一种灵敏度高、特异性强的DENV检测方法就变得很重要。环介导的等温扩增（LAMP）恒温反应、反应时间短、灵敏度高、特异性强,被广泛用于检测各种流行性疾病。然而,引物（特别是3’端）与模板之间的错配将显著削弱LAMP的效率,限制其对于基因多样性的病原微生物的应用。本研究针对这一问题,对传统LAMP体系进行优化,首次将具有3’-5’的外切酶活性的高保真酶应用于DENV的RT-LAMP检测中。当LAMP引物的3’端出现各种错配时,错配碱基都会因为高保真酶的3’-5’的外切酶活性而被切除,该方法展现出了对错配极佳的抗性。在每25μl的LAMP体系中,本研究通过优化,高保真酶的量为0.15 U时效果最佳。当检测30000拷贝/反应的DENV-4野生型与突变型模板时,改良过的新型抗突变RT-LAMP的检测阈值比传统RT-LAMP快了5.6-22.6 min,新型... 

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
第一章 研究综述
    1 虫媒病毒的传播
    2 登革热概述
    3 DENV检测现状
    4 环介导等温扩增技术
    5 本研究拟解决的问题及研究目标
第二章 实验材料与方法
    1 实验材料
    2 实验方法
第三章 实验结果与分析
    1 新型抗突变LAMP方法的原理
    2 新型DENV抗突变RT-LAMP的原理验证
    3 抗突变RT-LAMP优化结果
    4 DENV1-4型毒株检测结果
    5 DENV新型RT-LAMP的特异性
    6 DENV新型RT-LAMP的灵敏度与检测限
    7 可视化检测
    8 使用临床样本评估抗突变RT-LAMP对DENV的检测效果
第四章 讨论
    1 抗突变RT-LAMP原理
    2 抗突变RT-LAMP检测DENV1-4型毒株
    3 DENV抗突变RT-LAMP方法的特异性与灵敏度
    4 抗突变RT-LAMP的可视化检测
    5 抗突变RT-LAMP检测临床样本
第五章 研究总结
参考文献
硕士期间发表论文及参与课题
致谢



本文编号：3724605