基于单细胞全基因组扩增的同时检测基因点突变与染色体拷贝数变异的高通量测序方法的建立与评估

发布时间：2023-05-06 06:00

　　目的:通过活检废弃卵裂球胚胎结合分离外周血单个白细胞,进行单细胞全基因组扩增。研究高通量测序文库构建方法对DNA高通量测序测序覆盖度、敏感性、特异性等的影响;研究不同测序深度及获取数据量对DNA高通量测序测序覆盖度、敏感性、特异性等的影响;建立基于单细胞全基因组扩增的基因点突变及染色体拷贝数变异的高通量测序方法,优化单细胞全基因组扩增产物高通量测序流程。以达到在同一个检测体系中同时完成染色体病及单基因遗传病的诊断。为染色体病及单基因遗传病的胚胎植入前诊断提供更为全面、经济及准确的方法。方法:在体视镜下分离已知致病突变位点的β地中海贫血患者外周血单个白细胞、活检废弃卵裂球胚胎。随后进行单细胞全基因组扩增,以单细胞全基因组扩增产物作为模板,对HBB基因目标区域进行PCR扩增。采用两种方法构建高通量测序文库:(1)单细胞全基因组扩增产物及PCR产物按1:99;3:97;5:95及10:90的比例混合后,再构建高通量测序文库;(2)单细胞全基因组扩增产物及PCR产物分别构建高通量测序文库,两种测序文库按1:99;3:97;5:95及10:90的比例混合。0.1×、2×测序深度下进行高通量测序。...

【文章页数】：84 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
中英文缩略词表
引言
第一部分 研究方案可行性验证及实验流程建立
    1 材料
    2 方法
    3 结果
    4 讨论
第二部分 研究不同建库方案、测序深度对通过高通量测序同时检测基因点突变和染色体拷贝数变异的影响
    1 材料
    2 方法
    3 结果
    4 讨论
第三部分 应用高通量测序同时检测基因点突变和染色体拷贝数变异检测方案验证
    1 材料
    2 方法
    3 CMA芯片检测样本染色体CNV
    4 结果
    5 讨论
研究总结
参考文献
附录1 综述
    参考文献
附录2 在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果
致谢



本文编号：3809173