分子信标用于活细胞内源性mRNA检测的实验研究

发布时间：2017-05-24 09:00

  本文关键词：分子信标用于活细胞内源性mRNA检测的实验研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:观察分子信标(molecular beacons,MB)在活细胞内及在体水平对内源性m RNA检测的可行性。方法:合成增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,e GFP)的MB,模拟体内条件,分别从MB的稳定性、与目标基因结合的特异性和敏感性进行检测,并通过在活细胞和斑马鱼胚胎内的应用来观察其对内外源性m RNA的检测的可行性。结果:MB在37℃条件下在体外48小时内经琼脂糖凝胶电泳鉴定未见降解,熔解曲线结果显示荧光强度差异无统计学意义(P0.05);并且只有在靶序列存在的条件下MB的信号强度显著增强,MB的信号强度与靶基因浓度呈正相关并能基本稳定存在;经e GFP和靶向e GFP的MB共转染的293T细胞能看到荧光表达,靶向e GFP的MB可特异性结合细胞内e GFP的m RNA;在单细胞期斑马鱼胚胎内共注射MB以及目标单链后能观察到荧光表达。结论:结果表明分子信标可用于活细胞内内源性m RNA的检测。
【作者单位】： 上海长海医院心血管内科;上海浦东新区公利医院;中国人民解放军第一一七医院心血管中心;
【关键词】： 分子信标(MB) 内源性 熔解曲线 SLO 斑马鱼
【基金】：国家自然科学基金面上项目(81470407)
【分类号】：R3416
【正文快照】： Chinese Library Classification(CLC):R-33;Q599 Document code:AArticle ID:1673-6273(2016)17-3227-05前言MB是于1996年由Tyagi和Kramer首次共同发现的单链寡核苷酸探针,一般包括环状区(Loop)、茎干区(Stem)、荧光基团(fluorophore)和猝灭基团(Quencher)四部分结构[1]。在

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