临床分离非伤寒沙门菌耐药性和对头孢曲松耐药机制的初步研究

发布时间：2017-07-17 02:06

  本文关键词：临床分离非伤寒沙门菌耐药性和对头孢曲松耐药机制的初步研究

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【摘要】：目的研究天津地区急性腹泻患者粪便标本分离的非伤寒沙门菌(NTS)对常用抗菌药物的敏感性,对头孢曲松耐药株和中介耐药株进行分子分型和超广谱β内酰胺酶(ESBLs)基因、头孢菌素酶(Amp C)酶基因检测,了解其对头孢曲松耐药的机制,为本地区治疗非伤寒沙门菌感染临床合理使用抗菌药物和预防控制提供依据。方法1.菌株的分离鉴定和抗菌药物敏感性试验:对2014年5-10月间就诊于天津医科大学第二医院和天津医科大学总医院肠道门诊的急性腹泻患者的粪便标本进行培养,采用生化鉴定、血清学鉴定并结合PCR检测inv A基因确定非伤寒沙门菌。采用K-B法对所有的非伤寒沙门菌菌株进行11种抗菌药物的敏感性试验,对头孢曲松耐药株和中介耐药株进一步检测对阿奇霉素的敏感性。2.PFGE和MLST:对头孢曲松耐药株和中介耐药株采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)的方法进行分子分型鉴定。PFGE采用限制性内切酶Xba I酶切,获得聚类分析图谱;MLST将扩增沙门菌的7个管家基因(thr A,pur E,suc A,his D,aro C,hem D,dna N),将测序结果与国际数据库网站比较后获得等位基因图谱和ST型。3.ESBLs和Amp C酶基因的检测:对头孢曲松耐药株和中介耐药株采用聚合酶链式反应扩增ESBLs基因(TEM、SHV、CTX-M、OXA)和Amp C酶基因(ACC、CMY),获得阳性结果后进行DNA序列分析。结果1.生化鉴定和血清学鉴定结果与PCR扩增inv A基因的鉴定结果一致,共分离得到非重复非伤寒沙门菌108株,88株来自天津医科大学第二医院,20株来自天津医科大学总医院。2.108株非伤寒沙门菌中,多重耐药率达到17.6%。对萘啶酸、环丙沙星、左氧氟沙星、头孢曲松和厄他培南的敏感率依次为61.10%、68.50%、66.70%、97.10%和100.00%。3.发现了3株头孢曲松不敏感菌株。其中2株头孢曲松耐药株为肠炎沙门菌Sa8709和Sa8771,1株头孢曲松中介株为鼠伤寒沙门菌Sa8763,都是多重耐药株。Sa8709分离自天津医科大学第二医院,对氨苄西林、萘啶酸、头孢曲松和阿奇霉素耐药,对环丙沙星中介耐药;Sa8771分离自天津医科大学总医院,对氨苄西林、链霉素、萘啶酸、头孢曲松、头孢他啶耐药,对环丙沙星和左氧氟沙星中介耐药;Sa8763分离自天津医科大学总医院,对氨苄西林、萘啶酸、左氧氟沙星、环丙沙星、氯霉素、四环素和阿奇霉素耐药,对头孢曲松中介耐药。4.Sa8709、Sa8771和Sa8763的PFGE带型不同,聚类分析显示Sa8709和Sa8771相似度较高,为91.70%,与Sa8763相似度较低,为55.80%。经MLST分型后,Sa8709、Sa8771为ST11型,Sa8763为ST34型。5.Sa8709扩增出符合预期长度的CTX-M基因片段,Sa8771扩增出符合预期长度的CTX-M基因片段和TEM基因片段,Sa8763扩增出符合预期长度的OXA基因片段,测序结果经与对应的基因序列Gen Bank对比后相似性均在98%以上。结论1.本地区临床分离的非伤寒沙门菌呈现一定程度的多重耐药性,未发现对碳青霉烯类耐药。2.本地区临床分离的非伤寒沙门菌对氟喹诺酮类药物环丙沙星和左氧氟沙星的敏感性低于70%,应考虑重新评估氟喹诺酮类药物是否仍适于非伤寒沙门菌感染的经验治疗和细菌感染性腹泻的经验治疗。3.本地区出现了携带ESBLs基因对氟喹诺酮类、头孢曲松和阿奇霉素都耐药的肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌,对公众健康构成极大威胁。4.本地区应持续开展对临床分离的非伤寒沙门菌的分子分型和耐药监测研究。
【关键词】：非伤寒沙门菌 耐药 氟喹诺酮 广谱头孢菌素 多位点序列分型 脉冲场凝胶电泳 超广谱β内酰胺酶 头孢菌素酶
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R446.5
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 缩略语/符号说明11-13
• 前言13-17
• 研究现状、成果13-16
• 研究目的、方法16-17
• 一、非伤寒沙门菌的分离鉴定和抗菌药物敏感性监测17-29
• 1.1 材料和方法17-21
• 1.1.1 菌株来源17
• 1.1.2 主要试剂17-18
• 1.1.3 主要仪器18
• 1.1.4 菌株的保存18
• 1.1.5 菌株的分离和生化鉴定18-19
• 1.1.6 菌株的PCR鉴定19-20
• 1.1.7 菌株的血清学鉴定20
• 1.1.8 菌株的抗菌药物敏感性试验20-21
• 1.2 结果21-24
• 1.2.1 非伤寒沙门菌株的临床资料21
• 1.2.2 非伤寒沙门菌的分离和生化鉴定、血清学鉴定结果21
• 1.2.3 非伤寒沙门菌的PCR鉴定结果21-22
• 1.2.4 非伤寒沙门菌的药敏试验结果22-24
• 1.3 讨论24-28
• 1.4 小结28-29
• 二、非伤寒沙门菌头孢曲松不敏感株的基因分型和超广谱β内酰胺酶的检测29-45
• 2.1 材料和方法29-35
• 2.1.1 菌株来源29
• 2.1.2 主要仪器29
• 2.1.3 主要试剂29-30
• 2.1.4 对头孢曲松耐药、中介株的阿奇霉素药物敏感性试验30
• 2.1.5 脉冲场凝胶电泳30-32
• 2.1.6 多位点序列分型32-34
• 2.1.7 头孢曲松不敏感菌株的ESBLs和AmpC的检测34-35
• 2.2 结果35-38
• 2.2.1 菌株的基本临床资料35-36
• 2.2.2 阿奇霉素的药敏试验36
• 2.2.3 菌株的PFGE分型36
• 2.2.4 菌株的MLST分型36-37
• 2.2.5 菌株的ESBLs和AmpC基因的检测37-38
• 2.3 讨论38-44
• 2.4 小结44-45
• 结论45-46
• 参考文献46-55
• 发表论文和参加科研情况说明55-56
• 综述 非伤寒沙门菌的耐药性和对广谱头孢菌素耐药机制的研究进展56-69
• 综述参考文献61-69
• 致谢69-70
• 个人简历70

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本文编号：551490