广泛耐药鲍曼不动杆菌ST238克隆株毒力及适应性研究

发布时间：2017-08-31 08:45

  本文关键词：广泛耐药鲍曼不动杆菌ST238克隆株毒力及适应性研究

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【摘要】：研究背景:近年来,鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)由于迅速发展的耐药能力已成为世界广泛关注的医院感染病原菌。临床上多重耐药及泛耐药菌株的出现使其治疗面临无药可选的境地。在过去的10年间,我院细菌监测数据显示,AB的临床分离率呈现出逐年上升的趋势。至2009年AB占我院当年细菌感染的17.9%,成为非发酵菌第一位致病菌。2010年AB超过大肠埃希菌,成为导致院内感染的第一位病原菌,其在革兰阴性菌中比例高达24.6%。流行病学研究发现我院存在广泛耐药鲍曼不动杆菌(Extensively drug-resistant Acinetobacter baumannii,XDRAB)A、B、C三个克隆的流行。多位点测序(Multilocus sequencing typing,MLST)分析发现,B克隆与C克隆均为ST238型,而A克隆与其相比仅有一个管家基因(gpi)的差异,也属于ST238型。ST238克隆株与全球流行的CC92群有较高同源性,但与中国报道的主要克隆株ST22、ST381、ST208和ST92不同。各个国家和地区均未见有关ST238克隆株暴发流行的报道,仅巴西曾在PubMLST注册过一例ST238克隆株,但没有相关文献。我院流行的ST238克隆株仅对多粘菌素和替加环素敏感,国内外尚无有关ST238克隆株毒力和适应性的研究报道。既往研究认为抗菌药物的选择压力及克隆传播可能是st238克隆株在我院长期存在的主要原因,但近年来我院加强对抗菌药物使用的管理,各类抗生素的使用量(尤其是碳青霉烯类)较2009年均有明显下降,然而我院xdrab的分离率仍然呈现逐年上升趋势,其中以st238克隆株为主。因此,研究xdrabst238克隆株的毒力及环境适应性,对发现其持续流行原因以及了解其流行性与致病性的相关性具有重要意义。研究该细菌的毒力及生存适应性也可以为控制其医院感染提供指导。研究该细菌的致病性有助于建立快速准确的诊断方法,以此来区分其定植和感染。在抗菌药物可能失效的情况下,研究其致病性对设计新的抗菌药物的治疗靶点也有参考作用。目的:通过检测广泛耐药鲍曼不动杆菌流行克隆st238的毒力和环境适应性,探讨该克隆株在本地区持续流行的原因。方法:第一部分:比较st238克隆株与鲍曼不动杆菌atcc19606的体外生长曲线及竞争指数(competitionindex,ci)。第二部分:试管法测定菌株内明胶酶活性;微量法进行d-甘露糖抵抗红细胞凝集试验;运动平板法测定蹭行运动能力;结晶紫染色法定量分析生物被膜形成能力。第三部分:小鼠腹膜炎模型检测菌株的体内致病能力。结果:第一部分:st238克隆株与标准株间体外生长能力无统计学差异(p0.05)。培养24h时,st238克隆株与atcc19606的体外竞争能力无明显差异(ci=0.29,p0.05)。第二部分:仅有1株st238克隆株检测到明胶酶活性,明胶酶活性在ST238克隆株与敏感株间无分布差异(?2=0.216,P0.05)。D-甘露糖可使ST238克隆株和敏感株的O型及AB型红细胞凝集阳性率升高,但血凝结果与菌株来源之间无显著性差异(?2=0.659,P0.05),提示AB的菌毛多属于甘露糖抵抗型。98株临床分离的ST238克隆株蹭行运动能力均为阴性,而在21株随机选取的敏感株中有33.3%的菌株蹭行运动监测为阳性,提示敏感株的运动能力强于ST238克隆株(?2=74.044,P0.001)。敏感组生物被膜形成能力强于ST238克隆组(P0.05)。第三部分:ST238克隆株与标准株的LD50分别为6.9和6.7 log CFUs/mL。接种9.3 log CFUs/mL菌液的小鼠平均死亡时间无显著统计学差异(P0.05)。结论:ST238克隆株获得广泛耐药性后,其环境适应性无明显下降,同时该克隆株的毒力也无明显改变。这种特点与一般耐药细菌不同,该流行克隆具有广泛耐药的特征,同时也具有较强的毒力和环境适应性。这种生物学特性可能是该克隆株在本地区长期流行的原因之一。
【关键词】：广泛耐药鲍曼不动杆菌 ST238克隆株 适应性 毒力
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R446.5
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-5
• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11-13
• 第一部分 鲍曼不动杆菌ST238克隆体外生长能力分析13-19
• 1 实验材料13-14
• 2 实验方法14-15
• 3 结果15-17
• 4 讨论17-19
• 第二部分 体外毒力试验19-27
• 1 实验材料19-20
• 2 实验方法20-23
• 3 实验结果23-24
• 4 讨论24-27
• 第三部分 体内动物试验27-34
• 1 实验材料27-28
• 2 实验方法28-30
• 3 结果30-32
• 4 讨论32-34
• 全文总结34-36
• 参考文献36-39
• 文献综述39-51
• 参考文献47-51
• 致谢51-52
• 攻读硕士期间发表的论文52

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