LXRs活化转录后调控THP-1巨噬细胞炎性细胞因子mRNA降解及其机制

发布时间：2017-08-31 08:45

  本文关键词：LXRs活化转录后调控THP-1巨噬细胞炎性细胞因子mRNA降解及其机制

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【摘要】：肝X受体(Liver X Receptors,LXRs)具有广谱抗炎特性,然而LXRs是否在转录后水平调控炎性细胞因子表达尚未阐明。mRNA降解调控是转录后调控基因表达的重要方式之一,AREs(AU-rich elements)介导的mRNA降解是炎性细胞因子m RNA代谢的一个共有方式。Tristetraprolin(TTP)作为一种典型的ARE结合蛋白,参与调控多种细胞因子mRNA降解。为阐明LXRs是否通过调控炎性细胞因子mRNA降解发挥抗炎特性,本研究通过体外细胞实验探讨LXRs在转录后水平调控基因表达的作用及机制。方法:佛波酯诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞,LXRs激动剂T0901317(10μM)预处理THP-1巨噬细胞6h后,予以脂多糖(10ng/mL)刺激6h,利用ELISA、PCR、Western Blot等技术检测TNF-α、IL-6、IL-1β和TTP mRNA及蛋白表达水平。不同因素处理组的THP-1巨噬细胞加入5ug/mL放线菌素D(Actinomycin D,Act D)终止转录,阻断转录后的不同时间点提取RNA,利用实时荧光定量PCR技术不同时间段TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA的表达水平,以阻断转录初始mRNA为标准计算mRNA残留比例。通过小分子siRNA技术进行细胞转染18h后,Western blot、ELISA检测TTP siRNA沉默TTP表达效果和炎性细胞因子表达影响,实时荧光定量PCR检测不同处理因素组炎性细胞因子mRNA表达水平。结果:T0901317预处理显著抑制脂多糖诱导的THP-1巨噬细胞IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA及蛋白表达,且T0901317预处理显著上调LPS诱导的THP-1巨噬细胞TTP表达。放线菌素D阻断转录后60,90,120min时间点,T0901317预处理的THP-1巨噬细胞显著抑制LPS诱导的TNF-α,IL-6,IL-1βm RNA表达水平,残留比例显著低于单纯LPS处理组,说明T0901317预处理促使LPS诱导的TNF-α,IL-6,IL-1βmRNA降解。TTP siRNA转染的THP-1巨噬细胞显著下调TTP的表达,并明显抑制T0901317下调炎性细胞因子表达和促进炎性细胞因子mRNA降解的作用。结论:1.LXRs活化转录后调控THP-1巨噬细胞炎性细胞因子mRNA降解。2.LXRs通过TTP促使LPS诱导的THP-1巨噬细胞炎性细胞因子mRNA降解。本研究明确了LXRs转录后调控炎症反应的新型分子机制,为多靶点广谱抗炎治疗全身炎症反应综合征等急慢性炎症性疾病开拓新思路,为抗炎药物开发提供新靶点。
【关键词】：肝X受体 mRNA降解 Tristetraprolin 炎性细胞因子
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R459.7
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 缩略词表9-13
• 第一部分 LXRs活化对LPS诱导的THP-1巨噬细胞炎性细胞因子mRNA降解的影响13-33
• 1.前言13-15
• 2.实验材料15-17
• 3.实验方法17-23
• 4.实验结果23-27
• 5 讨论27-31
• 6 小结31-33
• 第二部分 LXRs活化促使炎性细胞因子mRNA降解的相关分子机制33-47
• 1.前言33-35
• 2.实验材料35
• 3.实验方法35-37
• 4.实验结果37-43
• 5讨论43-47
• 结论47-49
• 参考文献49-53
• 介导mRNA降解的转录后调控炎症反应机制及进展 综述53-61
• 参考文献57-61
• 作者攻读学位期间的科研成果61-63
• 课题资助63-65
• 致谢65

【参考文献】

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1 李涛;向蕾;涂剑;;肝X受体——胆固醇逆转运与炎症的共同平台[J];中国动脉硬化杂志;2014年04期

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本文编号：764624