福尔马林和薄荷醇对DRG神经元TRPA1和CGRP表达的影响作用及其机制

发布时间：2017-09-03 13:31

  本文关键词：福尔马林和薄荷醇对DRG神经元TRPA1和CGRP表达的影响作用及其机制

  更多相关文章： 福尔马林 薄荷醇 瞬时受体电位锚蛋白1 降钙素基因相关肽 初级传入神经元 背根神经节

【摘要】：瞬时受体电位锚蛋白1 (transient receptor potential ankyrin 1, TRPA1)是瞬时受体电位(transient receptor potential, TRP)家族的一个成员,是在感受伤害性刺激神经元表达的离子通道,可被多个反应性的化合物所激活。最近的研究显示,福尔马林(formaldehyde, formalde)可激活TRPA1,而薄荷醇则可抑制TRPA1。降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide, CGRP)是一种在初级传入神经元表达的感觉神经肽,其感觉神经元的释放与TRPA1的激活有关。然而,TRPA1的激动剂福尔马林和TRPA1的抑制剂薄荷醇是否会影响背根神经节(dorsal root ganglion, DRG)初级传入神经元TRPA1和CGRP的表达,目前并不清楚。因此,本课题利用体外培养的新生大鼠DRG神经元,研究福尔马林和薄荷醇对DRG神经元TRPA1和CGRP表达的影响作用,并进一步探讨细胞外信号调节蛋白激酶1/2 (extracellular signal-regulated protein kinase, ERK1/2)信号通路在福尔马林和薄荷醇对DRG神经元TRPA1和CGRP表达所发挥的作用,以及TRPA1与TRPV1受体在DRG神经元原位表达的相互作用关系。DRG神经元原代培养48 h后,用于探测TRPA1和CGRP表达的DRG神经元,预先用辣椒素受体阻断剂辣椒平(capsazepine, CPZ,10 μmol/L)孵育30 min,阻断辣椒素受体瞬时受体电位通道香草醛亚型-1 (transient receptor potential vanilloid typel, TRPV1)的活性,以消除TRPV1有可能对TRPA1产生的影响。之后,在DRG神经元原代培养中分别加入福尔马林(10μmol/L)、薄荷醇(300μmol/L)、ERK1/2抑制剂PD98059 (10 μmol/L)+福尔马林以及ERK1/2抑制剂PD98059 (10 μmol/L)+薄荷醇,继续孵育24 h,对照组的标本仅用CPZ (10μmol/L)孵育。终止培养后,用real-time PCR分析技术检测TRPA1 mRNA和CGRP mRNA在DRG神经元的表达,用Western blot分析技术检测TRPA1和CGRP蛋白在DRG神经元的表达,用TRPA1或CGRP与微管相关蛋白2 (microtubule associated protein 2, MAP2)进行免疫荧光双标记,检测TRPA1和CGRP在DRG神经元原位的表达。用于探测TRPA1与TRPV1共表达的DRG神经元,在正常培养48 h后,分别用福尔马林(10μmol/L)、薄荷醇(300μmol/L)、ERK1/2抑制剂PD98059(10 μmol/L)+福尔马林以及ERK1/2抑制剂PD98059 (10 μmol/L)+薄荷醇继续孵育24 h,对照组的标本在培养液内持续孵育。终止培养后,用TRPA1与TRPV1免疫荧光双标记检测两种受体在DRG神经元的共表达。结果显示,福尔马林可促进TRPA1及其mRNA、CGRP及其mRNA的表达、增加TRPA1阳性神经元和CGRP阳性神经元的比例；而薄荷醇则可抑制TRPA1及其mRNA、 CGRP及其mRNA的表达、降低TRPA1阳性神经元和CGRP阳性神经元的比例。ERK1/2抑制剂PD98059可以阻断福尔马林对CGRP表达的影响,但不能阻断薄荷醇对CGRP表达的影响；ERK1/2抑制剂PD98059不能阻断福尔马林和薄荷醇对TRPA1表达的影响；TRPA1受体和TRPV1受体在相同的DRG神经元亚群内高度共表达；福尔马林可提高TRPA1阳性神经元在TRPV1阳性神经元中所占的比例；薄荷醇可抑制TRPA1阳性神经元在TRPV1阳性神经元中所占的比例。本课题的研究结果将会对以TRPA1受体和感觉神经递质CGRP作为疼痛靶点的研究增添新的观点和实验依据。
【关键词】：福尔马林 薄荷醇 瞬时受体电位锚蛋白1 降钙素基因相关肽 初级传入神经元 背根神经节
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R402
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 符号及缩略语10-11
• 主要试剂及来源11-13
• 主要仪器设备13-14
• 前言14-17
• 材料和方法17-23
• 结果23-34
• 讨论34-37
• 结论37-38
• 参考文献38-45
• 攻读学位期间发表论文目录45-46
• 致谢46-47
• 附件47

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