拮抗放线菌FX-H-2的鉴定、发酵条件优化及生防效果评价

发布时间：2020-05-27 02:05

【摘要】：放线菌是一类资源丰富的微生物类群,能够产生多种次生代谢产物,其中抗生素是在生产实践中应用最广泛的,并且链霉菌是目前产生抗生素最多,研究最深入的。小麦纹枯病和小麦根腐病是近年来农业生产上发生严重的土传病害,危害程度及范围也呈逐年扩大的趋势。本实验室前期分离筛选获得一株放线菌菌株FX-H-2,本研究对该菌株进行了系统鉴定,以小麦纹枯病菌、根腐病菌等病原真菌为靶标,测定了该菌株的抑菌活性,优化其液态发酵条件,测定发酵滤液抑菌活性,并在温室盆栽条件下测定发酵滤液的防病效果以及对小麦植株防御酶系活性的影响。主要研究结果如下:1、放线菌分类地位鉴定对菌株FX-H-2进行形态特征、培养特征观察、生理生化特性测定以及16SrDNA序列分析,确定其分类地位。结果表明:FX-H-2的形态特征、培养特征及生理生化特性均与链霉菌属一致,16SrDNA序列共有1395 bp,利用GenBank数据库进行相关序列比对,菌株FX-H-2与丝裂霉素链霉菌(Streptomyces mutomycini)的同源性为99%,在系统发育树中的亲缘关系最近,鉴定放线菌菌株FX-H-2为丝裂霉素链霉菌。2、放线菌菌株FX-H-2抑菌活性测定采用平板对峙法观察到菌株FX-H-2对禾谷丝核菌(Rhizoctonia cerealis)、麦根腐平脐蠕孢菌(Bipolaris sorokiniana)等病原真菌有较好的抑制作用。3、液态发酵条件的优化采用L9(3~4)正交表,以禾谷丝核菌为靶标菌,对菌株FX-H-2的液体发酵条件进行优化。利用方差分析法和极差分析法,得到最优的发酵培养条件是发酵时间7d、装液量体积比3/10、发酵温度28℃,在此条件下获得的发酵滤液对病原菌的抑菌效果最好。4、发酵滤液抑菌活性测定采用菌丝生长速率法测定发酵滤液对禾谷丝核菌和麦根腐平脐蠕孢菌的抑制活性。当发酵滤液与培养基体积比为1/50时,抑菌率分别达到54.47%、64.10%。同时在显微镜下观察到病原菌的菌丝形态发生了变化,菌丝颜色变深,细胞隔膜间缩短,末端细胞壁增厚膨大。5、温室盆栽试验在温室条件下,用菌株FX-H-2的发酵滤液处理小麦植株幼苗,再接种小麦纹枯病菌和小麦根腐病菌,两种病害的发病率分别降低了43.34%、30.00%。测定发酵滤液处理和清水处理条件下小麦植株过氧化物酶、苯丙氨酸解氨酶、多酚氧化酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶5种防御酶活性大小及丙二醛含量。和清水对照相比,菌株FX-H-2发酵滤液处理使小麦植株体内5种防御酶活性全部提高。其中过氧化物酶和多酚氧化酶两种酶活性的提高发生较快,在前期就达到了高峰,苯丙氨酸解氨酶、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶三种酶活性的提高以及丙二醛含量的降低发生较慢,在后期达到了高峰。表明:放线菌菌株FX-H-2发酵滤液能激活小麦植株的防御酶系,诱导小麦产生抗病性。
【图文】：

孢子形态,放线菌,菌株,菌落

拮抗放线菌 FX-H-2 的鉴定、发酵条件优化及生防效果评价果与分析线菌菌株 FX-H-2 菌落及孢子形态观察据《链霉菌鉴定手册》中链霉菌属的形态及培养特征观察放线菌菌株 FX 1 号培养基平板上划线，25 ℃恒温培养菌株，7 d 后观察。结果发现：菌呈白色，不产生色素，，表面隆起且干燥不透明，边缘不规则向四周扩散；生不规则形状的孢子，表面光滑，在 20 倍显微镜下观察大小约 2.0 μm（见图

发酵条件优化,放线菌,纤维素水解,并图

FX-H-2 的鉴定、发酵条件优化及生gical and biochemical characterisolidification and peptonization); starch);D 纤维素水解(Hydrolyliquefaction).子生物学鉴定 FX-H-2 的 16SrDNA，并图 3.3。M 1 2
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S476

【参考文献】