诱导大豆抗胞囊线虫和灰斑病的生物种衣剂研制及其生防机制研究

发布时间：2020-05-31 19:28

【摘要】：本文以生产上危害严重的大豆胞囊线虫和大豆灰斑病为主要的防治对象,利用生防菌发酵液包衣处理大豆种子的方式,筛选出兼防大豆胞囊线虫和大豆灰斑病的生防菌株,并对筛选所获得的高效菌株Snef66与实验室前期筛选获得的Sneb207巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)和Sneb253委内瑞拉链霉菌(Streptomyces venezuelae)按照一定的比例进行复配,同时添加助剂制成新型的多功能的生物种衣剂SN103,并进行大田试验的验证,旨在安全有效的方式解决大豆胞囊线虫和大豆灰斑病在生产上的防治问题。在其高效防治大豆胞囊线虫和大豆灰斑病的基础上,对筛选出的有效菌株的分类地位,诱抗作用物质和作用机理进行了研究,其主要的研究成果如下:1.诱导大豆抗胞囊线虫病和灰斑病的生防菌株的筛选以大豆胞囊线虫和大豆灰斑病菌为靶标,通过4600株菌株发酵液包衣大豆种子在大田进行初筛试验,初步获得8株有效菌株,其中真菌6株,细菌2株。第二年将初筛获得的8株菌株进行温室盆栽试验和大田验证试验,最终筛选出的Snef66菌株不但能诱导大豆抗胞囊线虫和灰斑病,同时又具有促进生长和增加产量的作用。2.诱导大豆抗胞囊线虫病和灰斑病的生防菌株鉴定有效细菌菌株的鉴定:鉴定结果显示,细菌Sneb13为芽孢菌属,蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus);细菌Sneb16为沙雷氏菌属,普城沙雷氏菌(Serratia plymuthica)。有效真菌菌株的鉴定:依靠传统的形态学鉴定的方法,结合现代分子生物学技术,对筛选出的6株生防真菌进行鉴定。鉴定结果显示,真菌SnefL7为镰刀菌属,尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum);真菌Snef66为青霉菌属,草酸青霉菌(Penicillium oxalicum);3株真菌SnefX1、SnefX4、SnefX10均为木霉属真菌,分别为绿色木霉(Trichoderma viride)、拟康氏木霉(T.pesudokoningii)、长孢木霉(T.longipile);真菌SnefW31为曲霉菌属,黄曲霉(Aspergillus flavus)。利用高效液相色谱法(HPLC)检测菌株内东莨菪素的含量,结果显示,草酸青霉Snef66中含有东莨菪素,且含量较高。3.新型抗大豆胞囊线虫病和灰斑病的生物种衣剂的研制利用实验室前期筛选获得的2株对大豆胞囊线虫病有抗性的菌株与筛选获得草酸青霉Snef66进行混配,通过线虫触杀试验确定了最终的复配比例为Sneb207:Sneb253:Snef66=2×10~9:10~9:10~9=2:1:1。然后将复配制成的生物菌剂,添加助剂后进行一系列的室内试验和大田试验验证了其防效的稳定性,最终将其命名为SN103,SN103不仅对大豆胞囊线虫病和灰斑病防效显著,且对大豆发芽以及幼苗均有一定的促进作用。4.东莨菪素包衣种子诱导大豆抗灰斑病的研究经过检测在筛选获得的生防菌株Snef66草酸青霉菌的发酵液中含有东莨菪素,且与对照相比,东莨菪素含量较高。所以利用东莨菪素直接包衣处理大豆种子,通过平板对峙,种子萌发,促生,盆栽和大田等试验,证明了东莨菪素处理过的种子显著提高了对大豆灰斑病的抗性,且同时还能促进生长和增加产量。
【图文】：

图 1-1 大豆灰斑病病斑A. 不同时期病斑 B.D..显微图片正面；C.E.显微图片背面Figure 1-1Soybean gray spot disease spotA. The lesions in different periods B.D..microscopic picture front;C.E.microscopic picture back斑病的病原菌及侵染菌属大豆褐斑短胖孢菌，半知菌类尾孢属。分生孢子梗不分枝，淡褐色状，无色透明 ，基部钝圆 ，顶端尖细，具 1~9 个隔 ，（19~80）μm×（邵波，2012；丁俊杰，2009；丁俊杰等，2012；马淑梅，2011；顾鑫等黄桂潮，1984）。图 1-2 大豆灰斑病菌形态特征

图 1-1 大豆灰斑病病斑A. 不同时期病斑 B.D..显微图片正面；C.E.显微图片背面Figure 1-1Soybean gray spot disease spotA. The lesions in different periods B.D..microscopic picture front;C.E.microscopic picture back1.2.2 大豆灰斑病的病原菌及侵染大豆灰斑病菌属大豆褐斑短胖孢菌，半知菌类尾孢属。分生孢子梗不分枝，淡褐色。分生孢子圆柱形或倒棍棒状，无色透明 ，基部钝圆 ，顶端尖细，具 1~9 个隔 ，，（19~80）μm×（3.5~8.0）μm，无色透明（邵波，2012；丁俊杰，2009；丁俊杰等，2012；马淑梅，2011；顾鑫等，2010；曹越平等，2003；黄桂潮，1984）。
【学位授予单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S435.651

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本文编号：2690352