烟草蛋白-TCV P8互作影响病毒诱导的RNA沉默在细胞间传播机制的初步研究

发布时间：2020-07-01 18:32

【摘要】：Turnip crinkle virus(TCV)是卡莫病毒家族的成员,其基因组是以RNA形式存在于蛋白质病毒外壳中。该病毒的亚基因组RNA1则表达两个重叠的移动蛋白(MP)P8和P9,这两个蛋白参与TCV病毒细胞间和长距离的扩散,同时还参与病毒诱导的宿主RNA沉默的细胞间传播。对于拟南芥中与TCV病毒P8蛋白相互作用的Atp8蛋白已在本世纪初得到验证和分析。本课题则关注烟草Nicotiana benthamiana中Nbp8蛋白与TCV病毒P8蛋白的相互作用以及烟草N.benthamiana中可能与TCVp8蛋白相互作用的蛋白,以期待进一步揭示烟草蛋白与TCVp8蛋白的互作对病毒诱导的RNA沉默在细胞间传播的调控机制。对Atp8蛋白在烟草N.benthamiana中的同源蛋白Nbp8与TCVp8蛋白酵母双杂交互作的验证实验发现,Nbp8与TCVp8未表现明显的相互作用。TCVp8对拟南芥cDNA文库的酵母筛库及同源比对得到159个与TCVp8互作的蛋白,参考前人的研究和基因重复出现的次数最终确定Nb AT5G37740,Nb SYTA,Nb CSN5A和Nb WRKY21进行进一步筛选验证。已验证了Nb CSN5A与TCVp8在酵母双杂交实验中未表现明确的相互作用。下一步将验证筛选出的其他蛋白与TCVp8互作的情况,进而构建遗传材料以验证互作蛋白在TCVp8对RNA沉默细胞间传播过程中所起的作用。在确定了与TCVp8互作的蛋白后,可以探究在TCV侵染过程中,TCV对短距离RNA沉默传播影响的机制,进而提出一种植物抗病的新的可能。
【学位授予单位】：杭州师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S435.72
【图文】：

基因组结构

域是从一个核心支柱伸展出去的。gRNA 结构可以同应中的一种逃脱。比如，gRNA 的 RNA 二级结构和并且 RNA 折叠的程度与宿主细胞抗病毒反应产物的基因组也可以提供一种结构障碍，也就是与参与宿标位点结合的障碍（Chattopadhyay et al., 2015）。 TCV RNA 基因组只编码 5 个开放阅读框。5 ORF 和毒 RNA 复制所必须的(图 1.1)。两个小的细胞间移动 RNA（sgRNA）编码的移动蛋白。从基因组 3 端病毒外壳蛋白（CP）的 mRNA。尽管 CP 蛋白的基本功表明它在与病毒宿主细胞的相互作用中也起着关键强的抑制作用，这种抑制作用在 RNA 沉默的非常早表着一种独特的病毒编码的抑制子（Qu et al., 2003

传播机制,植物,二级,胞间连丝

siRNA 的积聚并封闭转移性沉默，但并没有封闭初级 siRNA 调控的沉默。一个明显的现象是 dcl2 突变体在所有情况下都终止了所有的二级 siRNA，包括由其他 DCL 产生的二级 siRNA。作为对比，DCL4 缺失突变体产生了一个发卡转入基因转移性沉默的巨大转变和对有意义转入基因的增强的沉默（Mlotshwa et al.,2008）。有限的沉默传播可能是通过胞间连丝完成。因为与邻近细胞通过胞间连丝的闭塞实现偶联独立的气孔防卫细胞，在拟南芥中的 RNA 沉默传播过程中并未受影响。另外，大范围的沉默的传播与由 SDE1 和 SDE3 介导的转移性相关。这是因为这种传播与二级而不是初级 siRNA 的生成密切相关，而且二级 siRNA 几乎不包括 21nt 大小的家族。

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