平菇黄斑病病原物种类多样性与品种抗病性初步研究

发布时间：2020-07-21 14:32

【摘要】：平菇(Pleurotus ostreatus Kummer)是全世界广泛栽培的食用菌之一。平菇黄斑病是平菇栽培中最重要的病害,据报道主要由托拉斯假单胞杆菌(Pseudomonas tolaasii Paine)引起,症状通常表现为菌盖表面出现大面积黄化或出现黄色锈斑,有时会在菌盖表面产生凹陷的病斑,严重时整个子实体卷曲萎黄,甚至完全腐烂。当栽培设施较差,栽培管理相对粗放,栽培环境潮湿且通风较差时,平菇黄斑病容易爆发,常造成重大经济损失。对平菇黄斑病病原物种类及品种抗病性开展研究,对进一步明确黄斑病发生规律,开展抗病品种选育和病害综合防治,都具有重要的现实意义。本研究在湖北、福建、北京、河南、辽宁等5个平菇主产省市18个栽培基地进行了平菇黄斑病调查,采集了97份病害标本。调查发现,平菇黄斑病田间症状存在黄色斑点类、黄色斑块类、黄化龟裂类、片状黄化类、黑色斑点类和菌盖湿腐类等六种类型。对感病组织进行分离与纯化,共获得了197株细菌分离物。通过观察细菌菌落形态,剔除了51株形态相同的培养物,将其它146株细菌分离物进行致病性验证,发现其中23株细菌分离物对平菇子实体具有明显的致病性,且在接种后感病的菌盖组织中能再次分离到细菌接种物,判断它们均为平菇黄斑病的病原物。根据菌落形态特征、16S rDNA分子序列Blast比对和Biolog系统鉴定结果,在23株细菌性病原物中鉴定出10个属11种细菌,包括5株托拉斯假单胞杆菌(Pseudomonas tolaasii),4株是应变假单胞杆菌(P.reactans),而栖霉菌属(Mycetocola)和肠杆菌属(Enterobacter)细菌各有3株,鞘氨醇杆菌属(Sphingobacterium)和沙雷氏菌属(Serratia)细菌各有2株,葡萄球菌属(Staphylococcus)、依格纳季氏菌属(Ignatzschineria)、普罗维登斯菌属(Providencia)和西地西菌属(Cedecea)等各有1株。采用Biolog系统进行进一步鉴定,明确沙雷氏菌属(Serratia)和葡萄球菌属(Staphylococcus)的3种病原物分别为居泉沙雷氏菌(Serratia fonticola)、普城沙雷氏菌(Serratia plymuthica)和松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri)。另有假单胞杆菌属2个菌株暂无法鉴定到种。采用不同病原物接种后观察其症状,发现不同的病原物引起不同的症状。托拉斯假单胞杆菌(Pseudomonas tolaasii)既能引起菌盖出现凹陷型黄褐色病斑,也能引起子实体蜷缩。应变假单胞杆菌(Pseudomonas reactans)和鞘氨醇杆菌属细菌(Sphingobacterium)主要引起黄化型症状。栖霉菌属(Mycetocola sp.)细菌也引起黄化症状,但多在子实体凹陷处形成斑块,也能导致菌盖停止发育。而肠杆菌属(Enterobacter)、松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri)和依格纳季氏菌属(Ignatzschineria)细菌感染后导致子实体表面出现分散的浅黄色斑点。上述研究结果表明,平菇黄斑病存在病原物多样性及症状多样性。接种病原物后出现的症状在田间调查中均有发现,但不能将田间症状与病原物种类完全对应起来。2018年春季在山东省泰安市调查了平菇97个栽培品种黄斑病自然发病率及病情指数,分析了品种抗病力与菌柄软硬程度和菌盖颜色深浅的相关性。依据菌盖色泽或菌柄硬度,将97个栽培品种分为60个菌盖色泽偏深的栽培品种和37个菌盖色泽偏浅的栽培品种,或将其分为74个菇柄偏硬的栽培品种和23个菌柄疏松偏软的栽培品种。结果表明,平菇菌柄疏松偏软的品种平均自然发病率和病情指数分别达到37.0%和21.12,均高于菌柄偏硬的品种(18.1%和8.04),F检验表明两者之间抗病能力差异达到极显著水平。平菇色泽偏深的品种平均自然发病率和病情指数分别为26.0%和13.06,高于色泽偏浅的品种(17.1%和8.02),但两类品种之间抗病性差异不显著。选择25个抗病力存在差异的平菇栽培品种,采用托拉斯假单胞杆菌进行接种试验,观察发现华平801等感病品种在接种后10 h内即可出现症状,而华平36等抗病品种在接种72 h之后才出现轻微症状。华平801等感病品种菌盖上病斑先局部变微黄色,后迅速扩展,最后菌盖大面积焦黄,且萎缩;华平36等抗病品种仅局部出现淡黄色斑点,病斑几乎不再扩展。
【学位授予单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S436.461
【图文】：

平菇,菌盖,黄化,症状类型

25图 3-1 部分平菇主产区的平菇黄斑类症状类型Fig 3-1 Symptom types of yellow blotch disease on P. ostreatus in the main cultivated areas注：1～4 黄色斑点类；5～6 黄色斑块类；7～8 菌盖黄化龟裂类；9～12 大片黄化类；13～16 黑色斑点类；17～18 菌盖湿腐类Note: 1~4, yellow spots; 5~6, yellow plaques; 7~8, yellow cracks; 9~12, extensive yellowing;13~16, black spots; 17~18, pileus wet rot

细菌分离,子实体,症状,感病

27图 3-2 23 株细菌分离物接种于华平 801 子实体后的感病症状Figure 3-2 Symptoms of 23 bacterial isolates after inoculating on fruit bodies of Pleurotusostreatus strain 801注：1：HX-3a、2：SY-7、3：JX-4、4:SN-6a、5：HX-3b、6：TZ-7、7：ZMD-4、8：ZMD-5、9：ZMD-2、10：HB-3、11：XZ-5b、12：SN-6b、13：F1-4、14：ZJL-3a、15：HN-1b、16：SY-11、17：SN-5a、18：DZ-1b、19：HB-1b、20：DZ-1a、21：ZJL-4b、22：ZJL-4c、23：HX-3cNote: 1, HX-3a; 2, SY-7; 3, JX-4; 4:SN-6a; 5, HX-3b; 6, TZ-7; 7, ZMD-4; 8, ZMD-5; 9, ZMD-2;10, HB-3; 11, XZ-5b; 12, SN-6b; 13, F1-4; 14, ZJL-3a; 15, HN-1b; 16, SY-11; 17, SN-5a; 18, DZ-1b;19, HB-1b; 20, DZ-1a; 21, ZJL-4b; 22, ZJL-4c; 23, HX-3c

电泳图,细菌分离,电泳图

华中农业大学 2018 届硕士研究生学位（毕业）论文3.2.3 16S rDNA 分子鉴定结果对 23 种病原菌用 16S 通用引物 27F 和 1492R 的进行 PCR 扩增，电泳检测结果如图 3-3，16S 扩增片段大小约为 1500 bp。将测序结果质控拼接后得到各病原物的16S rDNA 序列，提交到 NCBI 数据库进行 Blast 比对，与亲缘关系最近的的物种的部分序列比对结果见附录。

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