绿盲蝽抗呋虫胺品系的汰选与其解毒酶的研究
发布时间：2020-08-05 13:23
【摘要】：绿盲蝽Apolyguslucorum Meyer-diur属半翅目Hemiptera盲蝽科Miridae,是寄主广泛的害虫,分布范围广,在亚洲、欧洲、非洲、美洲都有发生,是我国近年来对棉花等重要经济作物危害严重的半翅目害虫之一,具有发生世代长、世代重叠严重的特点。在防治过程中,由于其在田间活动隐蔽、行动能力强,加大了防治的困难。目前,化学防治仍是对绿盲蝽的防治中最为有效的手段,但在田间长期不合理使用杀虫剂会导致绿盲蝽抗药性的发生,从而加大防治难度。本研究选择新鲜的四季豆饲养,在室内完成对绿盲蝽的连续饲养。采取点滴法,对绿盲蝽进行呋虫胺毒力测定和抗性品系筛选。测定了绿盲蝽羧酸酯酶和谷胱甘肽S-转移酶活性,探索这两种重要酶在绿盲蝽对呋虫胺的抗性品系选育过程的作用,是否参与绿盲蝽对呋虫胺抗性代谢。经过十二代的室内筛选,绿盲蝽对呋虫胺的抗性倍数仅达到近五倍,表现出低水平的抗性,推测产生高抗性的潜力较小。绿盲蝽对呋虫胺的抗性虽然呈波浪式升高趋势,但是抗性增加幅度却十分缓慢。在室内筛选中,对绿盲蝽羧酸酯酶和谷胱甘r繱-转移酶活性的测定,发现羧酸酯酶有显著性的提升,而谷胱甘肽S-转移酶无显著的变化,认为羧酸酯酶很可能参与了绿盲蝽对呋虫胺抗性的代谢。克隆得到两条绿盲蝽成虫细胞色素P450基因全长序列,分别为为CYP395G1和CYP4EY1。在对绿盲蝽CYP395G1和CYP4EY1与其他昆虫P450序列比对中发现,绿盲蝽CYP395G1与其他昆虫CYP家族序列一致性达30%,绿盲蝽CYP4EY1与昆虫其他CYP4家族序列一致性达60%。通过绿盲蝽CYP395G1和CYP4EY1两个基因在不同发育阶段表达分析,得出CYP395G1和CYP4EY1在绿盲蝽不同发育期均有表达。在呋虫胺短期诱导后,成虫体内CYP395G1的表达量在6h,12h,24h,36h和48h时的表达量分别为对照的1.26,1.91,0.92,0.50 和 0.37 倍。成虫体内 CYP4EY1的表达量在 6h,12h,24h,36h 和 48h时的表达量分别为对照的1.02,0.64,0.53,0.40和0.36倍,经12h短期诱导后CYP395G1表达量达到最大,而另一基因CYP4EY1表达量程下降趋势。经呋虫胺长期筛选后,F12的CYP395G1基因表达量有显著提升,CYP4EY1表达量仍然无显著变化,推测CYP395G1基因可能参与了呋虫胺的解毒过程。本研究通过生物学测定、分子生物学及生物化学分析等方法对绿盲蝽进行了研究,旨在为明确呋虫胺的绿盲蝽抗药性机制,为合理使用杀虫剂从而科学有效地防治绿盲蝽奠定基础。
【学位授予单位】：河南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S433.3
【图文】：
蓿盲蝽和三点盲蝽大量出现；７月份在大麻、杂草上产生较多的绿盲蝽和苜蓿盲蝽；８月份逡逑盲蝽更喜向日葵、蓖麻等油料作物；９－１０月份则转往蒿子及一些菊花植物；１０月份则在杂逡逑草、枯枝败叶中以卵越冬（见图１．１，出自朱弘复和孟样玲，１９５８）。逡逑３逡逑
对绿盲蝽室内筛选十二代，由表４．１可知ＬＣ５０从初始品系Ｆ０代５．８９５邋ｐｐｍ上升到Ｆ１２代逡逑２８．５５０邋ｐｐｍ，抗性倍数达到近五倍。自Ｆ０代至Ｆ７代ＬＣｗ值５．８９５邋ｐｐｍ到６．７２０邋ｐｐｍ，抗性逡逑未有增加；Ｆ９代增加到１３．２３３ｐｐｍ，但随后Ｆ１０又有回落，Ｆ１１和Ｆ１２程上升趋势。图４．１逡逑中可以看出绿盲蝽对呋虫胺的抗性呈波浪式升高趋势，抗性增加幅度却十分缓慢，截止到逡逑Ｆ１２代仍然属于低抗品系，但显示出抗性在低速持续增加。逡逑表４．１绿盲蝽对肤虫胺的抗性选育逡逑Ｔａｂｌｅ４．１邋Ｔｈｅ邋ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ邋ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ邋ｗｉｔｈ邋ｄｉｎｏｔｅｆｕｒａｎ邋ｔｏ邋ｔｈｅ邋Ａｐｏｌｙｇｕｓ邋ｌｕｃｏｒｕｍ逡逑世代逦斜率±逦卡方（自逦．ＬＣ５０（９５％ＦＬ）逦抗性倍数逦筛选剂量逦死亡率逡逑Ｇｅｎｅ－邋ＳＩｏｐｅ±ＳＥ邋由度）逦ｐｐｍ逦Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ邋Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ邋Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ逡逑ｒａｔｉｏｎｓ逦Ｘ＾ｄｆ５）逦ｆｏｌｄｂ逦ｄｏｓｅｓ逦逡逑Ｆ０逦１．７８士０．７０逦３．７２邋（３）逦５．８９５［４．６７４？７．４３５］逦１逦５ｐｐｍ逦４８％逡逑ＦＩ逦１．８７邋土０．７１逦２．７２（３）逦６．４４２［５．１８５邋？８．００３］逦１．０９逦１２．５ｐｐｍ逦８３％逡逑Ｆ２逦－逦－逦－逦１２．５ｐｐｍ逦６３％逡逑Ｆ３
图５．］吡虫啉与呋虫胺分子模型图逡逑Ｆｉｇ邋５．１．邋Ｂｉｎｄｉｎｇ邋ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ邋ＩＭＩ邋（ａ）邋ａｎｄ邋ＤＩＮ邋（ｂ）邋ａｔ邋０，４，邋８．１２邋ｎｓ邋ｏｆ邋ＭＤ邋ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ．逡逑纵观国内外有关昆虫细胞色素Ｐ４５０基因与昆虫抗药性的研[偅荒逊⑾郑诶コ娑愿麇义现掷嘈偷纳背婕恋目挂┬苑⒄构讨校校矗担岸挤⒒幼欧浅Ｖ匾淖饔谩Ｗ罱庑┠辏孀佩义峡蒲醒绣车牟欢辖校杂桑校矗担敖榈嫉纳背婕链豢剐曰频娜鲜吨鸾ゼ由睿欢诜皱义
本文编号：2781610
【学位授予单位】：河南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S433.3
【图文】：
蓿盲蝽和三点盲蝽大量出现；７月份在大麻、杂草上产生较多的绿盲蝽和苜蓿盲蝽；８月份逡逑盲蝽更喜向日葵、蓖麻等油料作物；９－１０月份则转往蒿子及一些菊花植物；１０月份则在杂逡逑草、枯枝败叶中以卵越冬（见图１．１，出自朱弘复和孟样玲，１９５８）。逡逑３逡逑
对绿盲蝽室内筛选十二代，由表４．１可知ＬＣ５０从初始品系Ｆ０代５．８９５邋ｐｐｍ上升到Ｆ１２代逡逑２８．５５０邋ｐｐｍ，抗性倍数达到近五倍。自Ｆ０代至Ｆ７代ＬＣｗ值５．８９５邋ｐｐｍ到６．７２０邋ｐｐｍ，抗性逡逑未有增加；Ｆ９代增加到１３．２３３ｐｐｍ，但随后Ｆ１０又有回落，Ｆ１１和Ｆ１２程上升趋势。图４．１逡逑中可以看出绿盲蝽对呋虫胺的抗性呈波浪式升高趋势，抗性增加幅度却十分缓慢，截止到逡逑Ｆ１２代仍然属于低抗品系，但显示出抗性在低速持续增加。逡逑表４．１绿盲蝽对肤虫胺的抗性选育逡逑Ｔａｂｌｅ４．１邋Ｔｈｅ邋ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ邋ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ邋ｗｉｔｈ邋ｄｉｎｏｔｅｆｕｒａｎ邋ｔｏ邋ｔｈｅ邋Ａｐｏｌｙｇｕｓ邋ｌｕｃｏｒｕｍ逡逑世代逦斜率±逦卡方（自逦．ＬＣ５０（９５％ＦＬ）逦抗性倍数逦筛选剂量逦死亡率逡逑Ｇｅｎｅ－邋ＳＩｏｐｅ±ＳＥ邋由度）逦ｐｐｍ逦Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ邋Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ邋Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ逡逑ｒａｔｉｏｎｓ逦Ｘ＾ｄｆ５）逦ｆｏｌｄｂ逦ｄｏｓｅｓ逦逡逑Ｆ０逦１．７８士０．７０逦３．７２邋（３）逦５．８９５［４．６７４？７．４３５］逦１逦５ｐｐｍ逦４８％逡逑ＦＩ逦１．８７邋土０．７１逦２．７２（３）逦６．４４２［５．１８５邋？８．００３］逦１．０９逦１２．５ｐｐｍ逦８３％逡逑Ｆ２逦－逦－逦－逦１２．５ｐｐｍ逦６３％逡逑Ｆ３
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本文编号：2781610
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