马来西亚无刺蜂Heterotrigona itama蜂胶中萜类成分的优化提
发布时间：2020-09-07 13:22
无刺蜂蜂胶(Geopropolis)是由蜜蜂科(Apidae)无刺蜂属(Trigona)的无刺蜂昆虫通过采集不同植物的嫩芽、树脂的分泌物以及自然中的土壤颗粒,混入自身分泌物形成的粘滞度较高的固形物质。受无刺蜂蜂种、地理环境、当地植物胶源差异以及不同的采胶时间等内在、外在因素影响,无刺蜂蜂胶有着独特而又复杂的化学组成,主要成分包括萜类、黄酮类、酚酸类、植物甾醇类和氧杂蒽酮类化合物,以及维生素、矿物质、游离脂肪酸、可水解单宁、皂甙、生物碱等。无刺蜂蜂胶复杂的化学组分决定了其多种活性,如抗氧化、抑菌、抗肿瘤、抗增殖、抗炎、抗病毒、抗突变等。与西方蜜蜂(Apis mellifera)所采集的蜂胶(Propolis)不同,无刺蜂蜂胶中的萜类化合物丰富含量较高,是其生物活性的重要物质基础及挥发性成分的主要来源,然而当前相关研究较为不足。Heterotrigona itama是一种广泛分布于热带地区的无刺蜂蜂种,本实验以采集于马来西亚沙捞越州的无刺蜂H.itama所产蜂胶为研究对象,针对其萜类成分优化提取及相关活性进行研究。主要研究结果如下:1.通过单因素实验设计以及响应面优化无刺蜂H.itama蜂胶中萜类成分的提取效率得出最佳工艺参数:95%的乙醇浸提蜂胶在浸提时间为72 h、料液比1:30 g/mL、浸提3次时,无刺蜂H.itama蜂胶中的萜类物质提取率最高(46.44±0.07%)。2.根据实验室现有的五种萜类标准品和制备纯品,通过LC-MS/MS(液相色谱-二级质谱联用)对无刺蜂H.itama蜂胶中的主要萜类成分相对含量进行分析,结果表明无刺蜂H.itama蜂胶含有(24E)-Dammara-20,24-dien-26-al 0.926 mg/g,α-香树精 1.029 mg/g,24(E)-cycloart-24-ene-26-o1-3-one 0.304 mg/g,20-hydroxy-24-dammaren-3-one 0.343 mg/g,龙脑香醇酮0.441 mg/g。3.利用体外清除自由基实验和细菌脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞炎症实验模型,评价无刺蜂H.itama蜂胶的抗氧化和抗炎症活性。体外实验表明H.itama蜂胶优化提取物的DPPH自由基和ABTS自由基清除率ICso分别为630.31±0.76 μg/mL和321.58±3.67μg/mL;细胞实验结果表明H.itama蜂胶优化提取物可能通过抑制促炎症基因iNOS(诱导型一氧化氮合酶)、IL-1β(白介素-1β)、IL-10(白介素-10)mRNA相对表达和促进抗氧化基因HO-1(血红素氧合酶1)mRNA相对表达来抑制炎症反应。综上,本课题优化了无刺蜂H.itama蜂胶中的萜类成分提取工艺参数;检测了无刺蜂H.itama蜂胶萜类优化提取物中的五种主要萜类成分含量;验证了无刺蜂H.itama蜂胶萜类优化提取物具有较好的抗炎活性和一定的抗氧化性。该研究结果可作为理论依据来促进无刺蜂H.itama蜂胶资源的开发与产品生产应用。
【学位单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S896.6
【部分图文】：
ｍｇ／ｍｌ邋的标准溶液，分别移取邋０．７ｍＬ、０．９ｍＬ、ｌ．ｌｍＬ、１．３ｍＬ、１．５ｍＬ、１．７ｍＬ邋的标准逡逑品６０°Ｃ水浴蒸干，按如上方法进行同样操作，最后进行测定并制作标准曲线。横坐标为熊逡逑果酸标准品的质量为横坐标，纵坐标为ＯＤ５４４ｎｍ吸光值，制作标准曲线如图２．１，曲线回归逡逑：＾ｇｙ＝４．１１４４ｘ－０．０２４８，Ｒ２＝０．９９４９。逡逑熊果酸标准曲线逡逑￡邋０．９逡逑Ｃ逡逑？邋０－８逦ｙ邋＝邋４．１１４４Ｘ－０．０２４８邋ｆ逡逑Ｑ邋０．７逦Ｒ＾邋＝邋０．９９４９．．．逡逑0邋？？？？？？逡逑０．６邋？？？？？逡逑０．５逡逑０．４逦．？？？？，？？逡逑０．３逡逑０．２邋一逡逑０，１邋逦—逡逑逦逦逦逦］逦逡逑ｎ邋，逦０．０５逦０．１逦０．１５逦０｜２逡逑－ｕ．邋ｉ逡逑质量／ｆｉｇ逡逑图２．１熊果酸标准曲线逡逑Ｆｉｇ．邋２．１邋Ｕｒｓｏｌｉｃ邋ａｃｉｄ邋ｓｔａｎｄａｒｄ邋ｃｕｒｖｅ逡逑２．３单因素实验逡逑以不同浸提溶剂、不同乙醇浓度、不同料液比、最佳浸提时间、不同浸提次数等５个逡逑单因素分别进行无刺蜂／／．／ｔｏＡＴＷ蜂胶的提取，考察提取产物中的萜类成分含量。蜂胶中萜逡逑类成分提取得率计算公式如下：逡逑
图２．２ＡＢ交互项的响应曲面图逡逑Ｆｉｇ．邋２．２邋Ｒｅｓｐｏｎｓｅ邋ｓｕｒｆａｃｅ邋ｇｒａｐｈ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ＡＢ邋ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ邋ｉｔｅｍ逡逑如图２．２所示，当固定液料比这一实验因素，来观察提取时间和浸提次数两种因素对逡逑无刺蜂／／．邋／ｔｏ／ｍｚ蜂胶萜类成分提取率的影响时可以看出，提取时间和浸提次数对无刺蜂／／．逡逑／ｔａｍａ蜂胶萜类成分提取率均有一定影响，提取T 间和浸提次数的交互作用对无刺蜂／／逡逑／ｔｏｍａ蜂胶萜类成分提取率的影响也比较显著。逡逑提S未义希回贺耍常板鍈桢义希矗福卞危卞危殄澹澹五澹у澹澹诲澹危澹危危澹徨澹у危苠义希悖阂毫媳儒我诲澹村危粒禾崛″澹咤危梗矗埃板遒ゅ澹咤蹇у澹梗福埃板义希保埃板澹保埃板义希羅炄∈盶″义贤迹玻冲澹粒媒换ハ畹南煊η嫱煎义希疲椋纾澹玻冲澹遥澹螅穑铮睿螅邋澹螅酰颍妫幔悖邋澹纾颍幔穑桢澹铮驽澹簦瑁邋澹粒缅澹椋睿簦澹颍幔悖簦椋铮铄澹椋簦澹礤义先缤迹玻乘荆惫潭ń岽问庖皇笛橐蛩兀垂鄄焯崛∈奔浜鸵毫媳攘街忠蛩囟藻义衔薮谭洌澹簦铮恚攴浣狠评喑煞痔崛÷实挠跋焓笨梢钥闯觯崛∈奔浜鸵毫媳榷晕薮谭洌义弦卜浣狠评喑煞痔崛÷示幸欢ㄓ跋
本文编号：2813395
【学位单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S896.6
【部分图文】：
ｍｇ／ｍｌ邋的标准溶液，分别移取邋０．７ｍＬ、０．９ｍＬ、ｌ．ｌｍＬ、１．３ｍＬ、１．５ｍＬ、１．７ｍＬ邋的标准逡逑品６０°Ｃ水浴蒸干，按如上方法进行同样操作，最后进行测定并制作标准曲线。横坐标为熊逡逑果酸标准品的质量为横坐标，纵坐标为ＯＤ５４４ｎｍ吸光值，制作标准曲线如图２．１，曲线回归逡逑：＾ｇｙ＝４．１１４４ｘ－０．０２４８，Ｒ２＝０．９９４９。逡逑熊果酸标准曲线逡逑￡邋０．９逡逑Ｃ逡逑？邋０－８逦ｙ邋＝邋４．１１４４Ｘ－０．０２４８邋ｆ逡逑Ｑ邋０．７逦Ｒ＾邋＝邋０．９９４９．．．逡逑0邋？？？？？？逡逑０．６邋？？？？？逡逑０．５逡逑０．４逦．？？？？，？？逡逑０．３逡逑０．２邋一逡逑０，１邋逦—逡逑逦逦逦逦］逦逡逑ｎ邋，逦０．０５逦０．１逦０．１５逦０｜２逡逑－ｕ．邋ｉ逡逑质量／ｆｉｇ逡逑图２．１熊果酸标准曲线逡逑Ｆｉｇ．邋２．１邋Ｕｒｓｏｌｉｃ邋ａｃｉｄ邋ｓｔａｎｄａｒｄ邋ｃｕｒｖｅ逡逑２．３单因素实验逡逑以不同浸提溶剂、不同乙醇浓度、不同料液比、最佳浸提时间、不同浸提次数等５个逡逑单因素分别进行无刺蜂／／．／ｔｏＡＴＷ蜂胶的提取，考察提取产物中的萜类成分含量。蜂胶中萜逡逑类成分提取得率计算公式如下：逡逑
图２．２ＡＢ交互项的响应曲面图逡逑Ｆｉｇ．邋２．２邋Ｒｅｓｐｏｎｓｅ邋ｓｕｒｆａｃｅ邋ｇｒａｐｈ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ＡＢ邋ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ邋ｉｔｅｍ逡逑如图２．２所示，当固定液料比这一实验因素，来观察提取时间和浸提次数两种因素对逡逑无刺蜂／／．邋／ｔｏ／ｍｚ蜂胶萜类成分提取率的影响时可以看出，提取时间和浸提次数对无刺蜂／／．逡逑／ｔａｍａ蜂胶萜类成分提取率均有一定影响，提取T 间和浸提次数的交互作用对无刺蜂／／逡逑／ｔｏｍａ蜂胶萜类成分提取率的影响也比较显著。逡逑提S未义希回贺耍常板鍈桢义希矗福卞危卞危殄澹澹五澹у澹澹诲澹危澹危危澹徨澹у危苠义希悖阂毫媳儒我诲澹村危粒禾崛″澹咤危梗矗埃板遒ゅ澹咤蹇у澹梗福埃板义希保埃板澹保埃板义希羅炄∈盶″义贤迹玻冲澹粒媒换ハ畹南煊η嫱煎义希疲椋纾澹玻冲澹遥澹螅穑铮睿螅邋澹螅酰颍妫幔悖邋澹纾颍幔穑桢澹铮驽澹簦瑁邋澹粒缅澹椋睿簦澹颍幔悖簦椋铮铄澹椋簦澹礤义先缤迹玻乘荆惫潭ń岽问庖皇笛橐蛩兀垂鄄焯崛∈奔浜鸵毫媳攘街忠蛩囟藻义衔薮谭洌澹簦铮恚攴浣狠评喑煞痔崛÷实挠跋焓笨梢钥闯觯崛∈奔浜鸵毫媳榷晕薮谭洌义弦卜浣狠评喑煞痔崛÷示幸欢ㄓ跋
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