安徽省烟草根黑腐病发生规律及防控研究

发布时间：2020-09-22 17:59

　　烟草根黑腐病是一种危害烟草作物的真菌病害,全世界均有发病,烟草在幼苗期和较大烟株时均可染病,可使烟草根部变黑腐烂,病株叶片变黄、变薄,严重影响烟草产量和质量。目前,我国学者对根黑腐病主要进行了分子鉴定、致病力分化和生物学特性等研究;但安徽省对根黑腐病目前还没有相关报道,安徽烟区烟草根黑腐近年来也有逐渐加重的趋势,因此,本研究采集安徽省烟草根黑腐病典型病株,进行病原分离鉴定,开展生物学特性的研究、发病条件研究及烟草品种抗性评价研究,并筛选出防治烟草根黑腐病害的有效药剂及生防菌,以期为安徽省烟草根黑腐病菌的可持续控制技术研究提供理论基础,其主要研究结果如下:1.烟草根黑腐病菌的分离鉴定选用具有典型症状的烟草根黑腐病烟株,采用胡萝卜圆片法分离病原菌,根据病原菌的培养形态和rDNA-ITS区序列对病原菌种类进行鉴定,采用灌根法对病原菌进行致病性测定,结果表明:通过胡萝卜圆片法对烟草发病根部进行分离,得到烟草根黑腐病原菌菌株,经过形态学观察和rDNA-ITS分子鉴定,致病性测定和柯赫氏法则验证,确定安徽省烟草根黑腐病菌为基生根串珠霉[Thielaviopsis basicola(Berk.et Br.)Ferr]。2.烟草根黑腐病菌的生物学特性试验测定了烟草根黑腐病菌最适生长的培养基、最适菌丝生长和孢子萌发的温度、pH值、分生孢子致死温度,以及病原菌对碳、氮源的利用情况。结果表明:烟草根黑腐病病菌最适生长的培养基分别为V8培养基和PDA培养基,其中在V8培养基菌株生长最适宜,扩展趋势较好;病原菌菌丝在15℃~30℃之间生长良好,最适温度为25℃,分生孢子在5℃~35℃之间均可以萌发,分生孢子萌发率最高的温度为25℃;分生孢子在53℃下水浴10min后,不能萌发;最适pH均为6.0,在pH10~12时,菌株生长良好;氮源利用上,以尿素、硝酸锌为最佳氮源,在碳源利用上,以淀粉、麦芽糖、葡萄糖利用最佳,3种碳源差异并不显著。3.烟草根黑腐病发病条件及品种抗病性评价通过室内盆栽试验,研究了pH值、土壤含水量、接种体浓度、施氮量4个因素对烟草根黑腐病发病情况的影响;研究了主栽品种云烟87、云烟97、云烟85、K326、中烟100的抗病性。结果表明:当土壤pH偏弱酸性和碱性,有利于根黑腐病的发生,pH值较低时(pH4),能够抑制病害的发生;土壤湿度越大,烟草根黑腐病害的发生越严重,土壤含水量80%时,病株率和病情指数均最高,分别为88.9%和60.2;接种体浓度高于10~4个孢子/ml后,发病率与浓度呈正相关;氮肥用量的增加会加大烟草黑腐病的发病率。不同烟草品种间对烟草根黑腐病具有一定的抗性差异,其中云烟87和云烟97属高感品种;云烟85和K326属感病品种;中烟100属抗病品种,未筛选出高抗品种。4.防治烟草根黑腐病的有效药剂的筛选采用菌丝生长速率法和孢子萌发法测定了7种药剂对安徽省烟草根黑腐病菌[Thielaviopsis basicola(Berk.and Br.)Ferraris]的毒力,并在此基础上进行药剂的复配组合。结果表明:7种不同杀菌剂中,多菌灵和咪鲜胺对烟草根黑腐病菌菌丝生长抑菌效果最好,EC_(50)分别为0.0459μg/mL和0.0876μg/mL,其次抑菌效果较好的是:多吡唑嘧菌酯和苯醚甲环唑;吡唑嘧菌酯和多菌灵两种单剂对烟草根黑腐病菌分生孢子萌发的抑制效果最好,EC_(50)分别为0.0247μg/mL和0.567μg/mL;苯醚甲环唑、咪鲜胺、戊唑醇的抑制效果依次降低;由不同单剂组合对烟草根黑腐病菌抑制试验结果表明,最优的复配组合分别为多菌灵与苯醚甲环唑的配比组合A:A和A:D;吡唑嘧菌酯与申嗪霉素的配比组合A:B和C:B。5.枯草芽孢杆菌KC80-6发酵条件的优化及其对烟草根黑腐病的抑制效果本试验探究了枯草芽孢杆菌KC80-6的三种处理液(活菌液、过滤液、高温灭菌液)对烟草根黑腐病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用,并优化发酵培养基及发酵条件,以期为烟草根黑腐病的生物防治提供科学依据。结果表明:枯草芽孢杆菌KC80-6对烟草根黑腐病菌的菌丝生长和孢子萌发的均有一定的抑制作用,其中以活菌液效果最好,1×10~7cfu/ml的活菌液对菌丝生长和孢子萌发的抑制率分别达93.2%、95.3%,1×10~7cfu/ml的过滤液对菌丝生长和孢子萌发的抑制率为74.9%,93.4%,高温灭菌液对菌丝生长基本无抑制效果,对孢子萌发有较低的抑制作用,且三种处理液随稀释倍数的增加,抑制效果均逐渐降低。通过单因素试验、正交试验方法,确定该枯草芽孢杆菌KC80-6的优化培养基为蔗糖1.5%、酵母浸出物0.5%、硫酸镁0.06%;最适发酵条件为初始pH6.5,发酵温度28℃,接种量5%,摇床转速180 r/min,摇瓶装量40 m L/250 m L,为后期的大规模生产提供依据。6.化学药剂及生防菌对烟草根黑腐病的田间控病效果在室内试验的基础上,以云烟87为试验对象,对室内筛选出的有效药剂及生防菌开展田间控病效果研究,以期为大田推广提供科学依据。结果表明:6种单剂及2种复配剂对烟草根黑腐病均有一定的防治效果,其中,80%多菌灵可湿性粉剂、70%甲基托布津可湿性粉剂、50%咪鲜胺锰盐可湿性粉剂和复配2(多菌灵:苯醚甲环唑)800倍液防治效果相对较好,平均防效分别为92.48%、90.9%、84.15%、79.19%,且防效较稳定,具有一定的推广价值;生防菌活菌液对烟草根黑腐病大田防效达87.34%,且对烟株的生长具有一定的促进作用,为后期的大田生产使用提供科学依据。
【学位单位】：安徽农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S435.72
【部分图文】：

菌落形态,菌落形态,无性孢子,厚垣孢子

4 结果与分析4.1 烟草根黑腐病病原分离鉴定及致病性测定4.1.1 病原菌的形态学鉴定该菌株在 V8 培养基上生长较缓慢，菌落颜色为黑褐色，菌丝茂密（图 4-1），菌丝初透明无色，后呈褐色，有分隔，并呈 Y 分支，能产生两种类型的无性孢子，一种为内生分生孢子，由分生孢子梗顶端射出，无色，透明，呈圆柱形；另外一种无性孢子是厚垣孢子，呈链条状，可产生于菌丝顶端或侧面，多细胞，壁厚，厚垣孢子由两部分组成，基部由 1-3 个无色透明细胞，上部 4-5 个褐色细胞，成熟时，可分裂为单个细胞单独萌发（图 4-2）。

厚垣孢子,菌丝形态

电泳图,电泳图,病原菌

图 4-3 病原菌的 ITS -PCR 扩增电泳图Fig.4-3 ITS -PCR amplification of pathogenic bacter

【参考文献】