中国不同地区舞毒蛾mtDNA序列分析及饲养技术优化

发布时间：2020-11-16 06:16

　　 舞毒蛾Lymantria dispar(Linnaeus,1758),属鳞翅目(Lepidoptera),裳蛾科(Erebidae),毒蛾亚科(Lymantriinae),毒蛾属(Lymantria),是最重要的农林害虫之一。该物种分为欧洲型舞毒蛾(EGM)和亚洲型(AGM)舞毒蛾两个亚型。其中,亚洲型舞毒蛾因其寄主种类更广、雌性的飞行能力更强,长期以来被认为会对全球造成更大的威胁。鉴于此,为了更好地了解舞毒蛾特别是中国舞毒蛾种群的遗传结构,本文采集多个国家不同地区舞毒蛾的线粒体DNA序列片段进行了深入的分析,并对舞毒蛾人工饲养技术进行了优化。1.基于舞毒蛾线粒体COI基因的Barcoding研究结果:构建了分子系统发育树,显示中国舞毒蛾样本分为三组:第一组(贵州息烽)与亚洲及欧洲舞毒蛾相分离而独立形成一支。第二组包含大多数中国地理种群,聚合于世界舞毒蛾系统发育树中第一簇亚洲舞毒蛾支系中。中国贵州遵义和四川成都的样本形成了第三组,聚合于包含美国和欧洲种群的第二簇。其中,重复地区采样的舞毒蛾地理种群聚类研究结果与前期(Chen et al.,2015)结果一致。以上研究结果揭示了中国舞毒蛾种群具有广泛的遗传变异特性。2.本文从全球38个种群中提取了 4个线粒体蛋白编码基因(ND2、ND6、ATP6和ATP8),并利用贝叶斯法对舞毒蛾母系谱系进行了重建。结果显示中国舞毒蛾种群分布于四个不同的集群:中国Ⅰ聚合于亚洲舞毒蛾的进化支中;中国Ⅱ则成为了亚洲进化支的姐妹群;中国Ⅲ、Ⅳ嵌套在西欧和北美舞毒蛾的进化支里。研究还证实伊朗的舞毒蛾基因型是独立于三个亚种之外的新基因型。3.本文以亚洲型舞毒蛾和欧洲型舞毒蛾为供试虫,研究了不同人工饲养方法对其生长发育指标的影响。结果表明,饲料经Steam Kettle煮制后,能显著减少幼虫的感病率,其化蛹率和蛹重也显著增加。此外,网纱处理初孵幼虫这一措施,可增加初孵龄幼虫的成活率,并降低感病率。钻孔果冻杯饲养的幼虫生长情况最好,其化蛹率和蛹重显著高于方形培养皿及气窗式果冻杯饲养的幼虫。
【学位单位】：北京林业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S763.42
【部分图文】：

本研究共采集了?６个国家共２２个地理种群的舞毒蛾样本，相比之前的研究，着??重加大了中国舞毒蛾的采集量。在构建系统发育树时，部分ＣＯＩ序列数据来自于前期??（Ｃｈｅｎ?ｅｔａｌ．，２０１５）的研究。详细样本采集信息和序列数据见图２－１，表２－１、２－２。??采集到的舞毒蛾卵块经过消毒处理后，在实验室孵化并饲养至老熟幼虫，将老熟幼虫??饥饿处理２４ｈ后用无水乙醇杀死，后置于－８０°Ｃ超低温冰箱（ＶＸ３８０Ｆ，Ｔｈｅｒｍｏ，ＵＳＡ）??冻存，以备ＤＮＡ的提取。诱捕得到的成虫烘干后置于三角纸中低温保存，在需要提??取ＤＮＡ时取出。国内样本的采集都经森林保护总站批准，国外样本来源于经检疫部??门许可的舞毒蛾引进项目，饲养实验在动植物检疫室内完成。??１２??

舞毒蛾样本采集自４０个地区，其中中国有１７个，日本６个，韩国３个，哈萨克??斯坦１个，吉尔吉斯斯坦１个，俄罗斯３个，伊朗１个，欧洲５个，美国３个。采集??地点及每个采集地的取样数量见图３－１、表３－１。部分样本数据由美国农业部ＡＰＨＩＳ??提供。对幼虫进行饥饿处理２４小时后，将幼虫浸泡在无水乙醇中杀死并脱水备用。??舞毒蛾成虫毒杀后烘干保存，后进行ＤＮＡ提取。提取基因组ＤＮＡ具体方法及其质??量检测操作见２．２．２?ＤＮＡ提取方法。??｜?????＇?Ｉ??０?１，０００?＇?Ｎ??：＾＾丨：：??：：??ＡＶ?｛．０？，－?ｆｔ＇ＯＴ．?ｆｃＶ?１０（１＊?０＊０＊Ｆ．?｜（ＫＶ?Ｏ＇?０＊Ｆ?ＪｌＯ＊?０＇０＊Ｋ?１１５＊?０?ｆｔ＂Ｆ?〇？〇＊？．?！？Ｒ－?〇？〇？？??图３－１线粒体ＤＮＡ研宄中的舞毒蛾采样分布图??Ｆｉ

以ＬｖｗＭ／ｒ／＾ｒ?ｗｗＡｒｏｓａ为外群的基于４个线粒体蛋白质编码基因的ｔｆｏｐａ／＊?分歧日期分析，并假设每个位点每年替换率为ｌ．ｂｌＯ＇样本根据其地理来源以不色编码。后验概率显示在分支上方。分支长度与分歧时间成正比（Ｍｙａ）。??－２?ＭｔＤＮＡ?ｇｅｎｅａｌｏｇｙ?ａｎｄ?ｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅ?ｄａｔｅｓ?ｏｆ?Ｌｙｍａｎｔｒｉａ?ｄｉｓｐａｒ?ｄｅｒｉｖｅｄ?ｆｒｏｍ?ｆｏｕｒ?ｍｉｔｏｃｈｏ－ｃｏｄｉｎｇ?ｇｅｎｅｓ?ａｎｄ?ａｓｓｕｍｉｎｇ?ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ?ｒａｔｅｓ?ｏｆ?ｌ．?Ｉ?ｘ?１０－８?ｐｅｒ?ｓｉｔｅ?ｐｅｒ?ｙｅａｒ．?Ｌｙｍａｎｔｒｉａ?ｕｌｅｃｔｅｄ?ａｓ?ｔｈｅ?ｏｕｔｇｒｏｕｐ．?Ｓａｍｐｌｅｓ?ａｒｅ?ｃｏｄｅｄ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｌｏｒｓ?ａｃｃｏｒｄｉｎｇ?ｔｏ?ｔｈｅｉｒ?ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃｉｏｒ?ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ?ａｎｄ?ｂｏｏｔｓｔｒａｐ?ｖａｌｕｅ?ａｒｅ?ｓｈｏｗｎ?ａｂｏｖｅ?ｔｈｅ?ｂｒａｎｃｈｅｓ．?Ｂｒａｎｃｈ?ｌｅｎｇｔｈｓ?ａｒｅ?ｐｒｏｐｏｔｏ?ｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅ?ｔｉｍｅｓ?ｉｎ?ｍｉｌｌｉｏｎｓ?ｏｆ?ｙｅａｒｓ?（Ｍｙａ）．??２７??
【参考文献】

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本文编号：2885722