大豆疫霉细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶psCdc2及其与勃利霉素相互作用研究
发布时间：2020-12-27 20:14
在全球范围内大豆疫霉引起的大豆根腐病是一种极为严重的病害,在我国每年都会造成极大的经济损失。大环内酯类抗生素勃利霉素对大豆疫霉具有非常高的抑制活性,可能成为一种新型、高效的生物农药。前期研究显示,勃利霉素可以通过与大豆疫霉的苏氨酰-t RNA合成酶形成复合体抑制蛋白的合成,本研究旨在探索勃利霉素抗大豆疫霉病的其他途径。利用生物信息学方法分析大豆疫霉细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶psCdc2基因,其与勃利霉素抑制酵母的细胞周期作用靶标Cdc28基因高度同源,通过基因工程技术分别在大肠杆菌和酵母中克隆psCdc2,体外表达、纯化获得蛋白,利用荧光光谱分析了勃利霉素与psCdc2在体外的相互作用,并利用dsRNA介导psCdc2基因沉默技术研究了该基因的突变对大豆疫霉的影响。结果如下:（1）大豆疫霉细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶psCdc2生物信息学分析结果显示,该蛋白由20种氨基酸组成,蛋白分子量为35,478Da,等电点为8.56,是稳定存在的蛋白,无信号肽,为α/β型蛋白。在大豆疫霉基因组内找到了与酵母Cdc28基因存在相互作用10个蛋白同源的大豆疫霉的蛋白,蛋白的一致性百分比在26%-46%...
【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶psCdc2基因与pET-32a质粒重组示意图
胞周期蛋白依赖性蛋白激酶 psCdc2 基因与 pPIC9K 质粒重组转化示2-2 The map of construction and transformation of vector pPIC9K-psCdc2胞周期蛋白依赖性蛋白激酶 psCdc2 在毕赤酵母中表达9K 载体引物：TGGTTCCAATTGACAAGC 3'AATGGCATTCTGACATCC 3'粒 DNA 的制备表达载体 pPIC9K-psCdc2 的大肠杆菌，并大量提取质粒。利酶切，使其线性化。酶切体系如下：表 2-18 pPIC9K-psCdc2 质粒酶切体系able 2-18 Enzyme digestion reaction system of pPIC9K-psCdc2 plasm组份 体积（μL）
478 Da，等电点为8.56。该蛋白在大肠杆菌体内的半衰期大于10 h，酵母体内的半衰期大于20 h，属于稳定存在蛋白。蛋白的脂肪族系数为92.72，ProtScale程序的亲疏水性分析表明其亲水性略强（见图3-1）。信号肽分析程序signal P分析结果显示该蛋白质无信号肽（见图3-2）。图 3-1 大豆疫霉细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶 psCdc2 亲疏水性预测结果Fig 3-1 The hydrophobicity or hydrophilicity scales of psCdc2
【参考文献】：
期刊论文
[1]法莫替丁与牛血清蛋白相互作用的光谱研究[J]. 俞波,兰秀风,张林,邹如萍,陈奇. 激光与光电子学进展. 2018(04)
[2]大叶落地生根细胞周期蛋白依赖激酶KdCDK基因克隆及表达分析[J]. 朱敏群,梁小红,黄慧青,欧素荣,葛永强,张利娟,钟天秀. 华北农学报. 2017(03)
[3]我国大豆精深加工的现状和发展趋势浅析[J]. 马振云,逯楠. 农产品加工. 2016(19)
[4]大豆种植现状及高产栽培技术[J]. 王敏. 现代农业科技. 2016(09)
[5]农用抗生素高效发现新技术及系列新产品产业化[J]. 本刊采编部,刘源. 中国畜牧业. 2016(04)
[6]近年链霉菌次生代谢产物研究进展[J]. 程举,张孝龙,赵江源,文孟良,丁章贵,李铭刚. 中国抗生素杂志. 2015(10)
[7]微生物代谢产物在植物病害防治中的应用[J]. 张阳,刘重喜,王相晶,向文胜. 世界农药. 2013(03)
[8]新型血管生成抑制剂Borrelidin抗肿瘤作用及其合成的研究进展[J]. 周明,胡亮,余聂芳. 肿瘤药学. 2013(02)
[9]外源合成dsRNA介导大豆疫霉PsCdc14基因沉默后对孢子囊发育的影响[J]. 赵伟,杨新宇,董莎萌,盛玉婷,王源超,郑小波. 中国科学:生命科学. 2011(12)
[10]黑龙江省大豆品种对大豆疫霉根腐病抗性评价及抗性基因推导[J]. 徐鹏飞,姜良宇,李文滨,张淑珍,陈维元,吴俊江,李岑,邱丽娟,常汝镇,王金生. 中国油料作物学报. 2011(05)
博士论文
[1]大豆疫霉G蛋白α亚基调控游动孢子趋化性的机制研究[D]. 张鑫.南京农业大学 2015
[2]勃利霉素与靶酶ThrRS的作用位点及其抑制剂的虚拟筛选[D]. 李明.东北农业大学 2014
[3]大豆根部内生放线菌的筛选、鉴定及其活性代谢产物研究[D]. 刘重喜.东北农业大学 2013
[4]勃利霉素对卵菌抑制作用机理研究[D]. 高亚梅.东北农业大学 2013
[5]变性蛋白复性装置研制及包涵体蛋白变性和复性技术研究[D]. 冯延叶.华东理工大学 2013
[6]大豆疫霉GPCR-PIPKs基因家族及PsYKT6功能分析[D]. 赵伟.南京农业大学 2010
[7]大豆疫霉促有丝分裂原蛋白激酶PsSAK1和PsMPK1的功能分析[D]. 李爱宁.南京农业大学 2009
硕士论文
[1]辣椒疫霉质外体效应分子SCR209的功能分析[D]. 刘蓓蓓.扬州大学 2017
[2]恶疫霉PcF/SCR效应分子编码基因的转录特征、克隆和功能分析[D]. 李齐原.扬州大学 2015
[3]产黄青霉阿魏酸酯酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达[D]. 胡泓宇.齐鲁工业大学 2014
[4]土曲霉阿魏酸酯酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达[D]. 陈静.齐鲁工业大学 2013
[5]勃利霉素的抗菌活性研究[D]. 王亮.东北农业大学 2013
[6]大豆疫霉G蛋白α亚基互作蛋白的筛选及功能分析[D]. 郝玉娟.南京农业大学 2013
[7]Schizosaccharomyces pombe cdc2基因在产能微藻中的克隆与表达[D]. 朱万鹏.大连工业大学 2013
[8]大豆疫霉菌苏氨酰tRNA合成酶的初步研究及其抑制剂的筛选[D]. 刘翠翠.东北农业大学 2012
[9]大豆疫霉转录组研究及GPR功能分析[D]. 王晓莉.南京农业大学 2009
[10]疏棉状嗜热丝孢菌热稳定脂肪酶的基因克隆与表达[D]. 郑艳.山东农业大学 2008
本文编号：2942413
【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶psCdc2基因与pET-32a质粒重组示意图
胞周期蛋白依赖性蛋白激酶 psCdc2 基因与 pPIC9K 质粒重组转化示2-2 The map of construction and transformation of vector pPIC9K-psCdc2胞周期蛋白依赖性蛋白激酶 psCdc2 在毕赤酵母中表达9K 载体引物：TGGTTCCAATTGACAAGC 3'AATGGCATTCTGACATCC 3'粒 DNA 的制备表达载体 pPIC9K-psCdc2 的大肠杆菌，并大量提取质粒。利酶切，使其线性化。酶切体系如下：表 2-18 pPIC9K-psCdc2 质粒酶切体系able 2-18 Enzyme digestion reaction system of pPIC9K-psCdc2 plasm组份 体积（μL）
478 Da，等电点为8.56。该蛋白在大肠杆菌体内的半衰期大于10 h，酵母体内的半衰期大于20 h，属于稳定存在蛋白。蛋白的脂肪族系数为92.72，ProtScale程序的亲疏水性分析表明其亲水性略强（见图3-1）。信号肽分析程序signal P分析结果显示该蛋白质无信号肽（见图3-2）。图 3-1 大豆疫霉细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶 psCdc2 亲疏水性预测结果Fig 3-1 The hydrophobicity or hydrophilicity scales of psCdc2
【参考文献】：
期刊论文
[1]法莫替丁与牛血清蛋白相互作用的光谱研究[J]. 俞波,兰秀风,张林,邹如萍,陈奇. 激光与光电子学进展. 2018(04)
[2]大叶落地生根细胞周期蛋白依赖激酶KdCDK基因克隆及表达分析[J]. 朱敏群,梁小红,黄慧青,欧素荣,葛永强,张利娟,钟天秀. 华北农学报. 2017(03)
[3]我国大豆精深加工的现状和发展趋势浅析[J]. 马振云,逯楠. 农产品加工. 2016(19)
[4]大豆种植现状及高产栽培技术[J]. 王敏. 现代农业科技. 2016(09)
[5]农用抗生素高效发现新技术及系列新产品产业化[J]. 本刊采编部,刘源. 中国畜牧业. 2016(04)
[6]近年链霉菌次生代谢产物研究进展[J]. 程举,张孝龙,赵江源,文孟良,丁章贵,李铭刚. 中国抗生素杂志. 2015(10)
[7]微生物代谢产物在植物病害防治中的应用[J]. 张阳,刘重喜,王相晶,向文胜. 世界农药. 2013(03)
[8]新型血管生成抑制剂Borrelidin抗肿瘤作用及其合成的研究进展[J]. 周明,胡亮,余聂芳. 肿瘤药学. 2013(02)
[9]外源合成dsRNA介导大豆疫霉PsCdc14基因沉默后对孢子囊发育的影响[J]. 赵伟,杨新宇,董莎萌,盛玉婷,王源超,郑小波. 中国科学:生命科学. 2011(12)
[10]黑龙江省大豆品种对大豆疫霉根腐病抗性评价及抗性基因推导[J]. 徐鹏飞,姜良宇,李文滨,张淑珍,陈维元,吴俊江,李岑,邱丽娟,常汝镇,王金生. 中国油料作物学报. 2011(05)
博士论文
[1]大豆疫霉G蛋白α亚基调控游动孢子趋化性的机制研究[D]. 张鑫.南京农业大学 2015
[2]勃利霉素与靶酶ThrRS的作用位点及其抑制剂的虚拟筛选[D]. 李明.东北农业大学 2014
[3]大豆根部内生放线菌的筛选、鉴定及其活性代谢产物研究[D]. 刘重喜.东北农业大学 2013
[4]勃利霉素对卵菌抑制作用机理研究[D]. 高亚梅.东北农业大学 2013
[5]变性蛋白复性装置研制及包涵体蛋白变性和复性技术研究[D]. 冯延叶.华东理工大学 2013
[6]大豆疫霉GPCR-PIPKs基因家族及PsYKT6功能分析[D]. 赵伟.南京农业大学 2010
[7]大豆疫霉促有丝分裂原蛋白激酶PsSAK1和PsMPK1的功能分析[D]. 李爱宁.南京农业大学 2009
硕士论文
[1]辣椒疫霉质外体效应分子SCR209的功能分析[D]. 刘蓓蓓.扬州大学 2017
[2]恶疫霉PcF/SCR效应分子编码基因的转录特征、克隆和功能分析[D]. 李齐原.扬州大学 2015
[3]产黄青霉阿魏酸酯酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达[D]. 胡泓宇.齐鲁工业大学 2014
[4]土曲霉阿魏酸酯酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达[D]. 陈静.齐鲁工业大学 2013
[5]勃利霉素的抗菌活性研究[D]. 王亮.东北农业大学 2013
[6]大豆疫霉G蛋白α亚基互作蛋白的筛选及功能分析[D]. 郝玉娟.南京农业大学 2013
[7]Schizosaccharomyces pombe cdc2基因在产能微藻中的克隆与表达[D]. 朱万鹏.大连工业大学 2013
[8]大豆疫霉菌苏氨酰tRNA合成酶的初步研究及其抑制剂的筛选[D]. 刘翠翠.东北农业大学 2012
[9]大豆疫霉转录组研究及GPR功能分析[D]. 王晓莉.南京农业大学 2009
[10]疏棉状嗜热丝孢菌热稳定脂肪酶的基因克隆与表达[D]. 郑艳.山东农业大学 2008
本文编号：2942413
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