CYP6BG1和UGT33AA4介导的小菜蛾对氯虫苯甲酰胺抗性的分子机制
发布时间：2021-01-03 05:02
小菜蛾（Plutella xylostella）是世界范围内十字花科作物的重要害虫,也是抗药性最严重的害虫之一。氯虫苯甲酰胺是一种以鱼尼丁受体（RyR）为靶标的具有全新作用机制的双酰胺类杀虫剂,对鳞翅目害虫高效。但在使用2-3年后,小菜蛾即对其产生了高水平抗性。已经明确RyR突变是导致其产生抗性的主要机制,但对解毒酶介导的代谢抗性机制缺乏深入研究。本文主要研究细胞色素P450单加氧酶和尿苷二磷酸-糖基转移酶（UGTs）在小菜蛾对氯虫苯甲酰胺抗性中的作用,并从表观遗传学角度研究miRNA调控RyR过表达与氯虫苯甲酰胺抗性的关系。主要结果如下:对室内敏感种群CHS、室内筛选抗性种群CHR和云南通海田间种群TH小菜蛾羧酸酯酶、细胞色素P450单加氧酶和谷胱甘肽S-转移酶的比活力测定发现,只有P450的比活力在CHR和TH中均显著高于CHS,分别是CHS的2.1和3.2倍。检测了 10个P450基因mRNA的相对表达量,其中CYP6BG1在5个抗性种群中均过量表达,在TH种群的相对表达量是CHS的82倍。用RNAi沉默CYP6BG1后,P450的7-乙氧基香豆素O-脱乙基活性降低45.5%;用...
【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：99 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图４－１?ＰＣＲ鉴定果蝇品系中０７＾（７／基因??Ｆｉｇｕｒｅ?４－１?Ｉｄｅｎｔｉｆｙ?ｔｈｅ?ＣＹＰ６ＢＧＩ?ｉｎ?ｆｒｕｉｔ?ｆｌｉｅｓ?ｂｙ?ＰＣＲ??
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?＾?參??ｗ￡ｔ＾?＼：?ｖ?ｇ＾ｆｃｒ：＾??ＨＨＨＨＩ?■■■■??图５－１重组载体中ＣＴＰ仏Ｇ／和Ｃ７５／？全长ＰＣＲ电泳图??Ｆｉｇｕｒｅ?５－１?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｆｕｌｌ－ｌｅｎｇｔｈ?ｏｆ?ＣＹＰ６ＢＧＩ?ａｎｄ?ＣＰＲ??注：Ｍ：标准分子景?ＤＮＡ２０００?Ｍａｒｋｏｖ?Ｎｏｔｅ：?Ｍ：ＤＮＡ２０００Ｍａｒｋｅｒ．??５．２．２表达的小菜蛾ＣＹＰ６ＢＧ１蛋白活性??为了检测表达的ＣＴＰ６５Ｇ７蛋白是否具有活性，我们按照Ｂａｃｍｉｄ－ＣＹＰ６ＢＧ１／Ｂａｃｍｉｄ－ＣＰＲ为??按１：１、３：１、５：１、７：１和１０：１的比例表达了?ＣＹＰ６ＢＧ１蛋白，并检测了其对７－乙氧基香豆素的代??谢活性。根据荧光值的变化（表４－１），ｕｊ以看出，没有表达ＣＹＰ６ＢＧ１蛋白的细胞，处理组和对??照组的荧光强度没有变化，而表达了?ＣＹＰ６ＢＧ１蛋白的细胞，在Ｂａｃｍｉｄ－ＣＹＰ６ＢＧ１／Ｂａｃｍｉｄ－ＣＰＲ??不同比例下，处理组均显著高于对照组，说明处理组表达的ＣＹＰ６ＢＧ１蛋白具有Ｏ－脱乙基活性活??性并代谢了?７－乙氧基香豆素。最初随Ｂａｃｍｉｄ－ＣＹＰ６ＢＧ１所占比例升高其活性增强，但是比例达??到１０：１的时候
【参考文献】：
期刊论文
[1]小菜蛾抗性机理及可持续防抗对策[J]. 苏文敏,徐丽,郁东航,郁建飞. 长江蔬菜. 2016(08)
[2]昆虫对双酰胺类杀虫剂抗性机制研究进展[J]. 李秀霞,梁沛,高希武. 植物保护学报. 2015(04)
[3]转飞蝗CYP408B1和CYP409A1基因果蝇品系对杀虫剂的敏感性[J]. 高翠娥,张建琴,张徐波,张建珍,封云涛,吴海花,马恩波. 中国农业科学. 2015(06)
[4]小菜蛾不同抗性品系对杀虫剂的抗药性测定[J]. 程英,李文红,金剑雪,李凤良. 西南农业学报. 2014(03)
[5]氯虫苯甲酰胺对菜青虫鱼尼丁受体基因表达量的影响[J]. 邓放,周小毛. 湖南农业科学. 2014(07)
[6]华中地区小菜蛾对9种杀虫剂的抗药性测定[J]. 夏耀民,鲁艳辉,朱勋,申君,游红,李建洪. 中国蔬菜. 2013(22)
[7]shMRE11质粒转染对BEL7402/5-FU肝癌细胞耐药性的影响[J]. 范芳,耿磊,李长福. 细胞与分子免疫学杂志. 2013(10)
[8]氯虫苯甲酰胺对小菜蛾鱼尼丁受体基因mRNA表达量的影响[J]. 孙丽娜,杨代斌,芮昌辉,崔丽,袁会珠. 农药学学报. 2012(02)
[9]MicroRNA及其在昆虫学中的研究进展[J]. 梁沛,高希武. 应用昆虫学报. 2012(02)
[10]华南小菜蛾田间种群对氯虫苯甲酰胺已产生严重抗性[J]. 胡珍娣,陈焕瑜,李振宇,张德雍,尹飞,林庆胜,包华理,周小毛,冯夏. 广东农业科学. 2012(01)
博士论文
[1]小菜蛾对氯虫苯甲酰胺抗性的分子机制[D]. 郭磊.中国农业大学 2014
硕士论文
[1]杀虫剂对斜纹夜蛾UDP-葡萄糖基转移酶活性的影响[D]. 娄琳琳.南京农业大学 2014
本文编号：2954369
【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：99 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图４－１?ＰＣＲ鉴定果蝇品系中０７＾（７／基因??Ｆｉｇｕｒｅ?４－１?Ｉｄｅｎｔｉｆｙ?ｔｈｅ?ＣＹＰ６ＢＧＩ?ｉｎ?ｆｒｕｉｔ?ｆｌｉｅｓ?ｂｙ?ＰＣＲ??
Ａｃｔｉｎ－Ｇａｌ４?ＵＡＳ－ＣＹＰ６ＢＧ１?Ｇａｌ４＞ＵＡＳ－ＣＹＰ６ＢＧ１??图４－２不同果蝇品系中ＣＴＡ５５Ｇ／的相对表达量??Ｆｉｇｕｒｅ?４－２?Ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＣＹＰ６ＢＧＩ?ｉｎ?ｔｈｒｅｅ?ｆｒｕｉｔ?ｆｌｙ?ｓｔｒａｉｎｓ．??以?Ａｃｔｉｎ－Ｇａｌ４、ＵＡＳ－ＣＹＰ６ＢＧ１?和?Ａｃｔｉｎ－Ｇａｌ４＞Ｕ?ＡＳ（ＹＰ６ＢＧ?１?三个果蝇品系的?ＣＤＮ?Ａ?为模板，??采ＭＪ?ｑＲＴ－ＰＣＲ检测Ｃｍ５５Ｇ７的相对表达童。结果只在Ａｃｔｉｎ－Ｇａｌ４＞ＵＡＳ－ＣＹＰ６ＢＧｌ品系检测到??ＣＴＰｄ８Ｇ／的表达，在两个对照品系中均未检测到，其中的相对表达Ｍ是与内参基因相??比较的（图４－２）。??４．２．３不问果绳品系对杀虫剂的敏感性??为了研究果蝇中转入的ＣＴＰ６ＳＧ／是否影响其对杀虫剂的敏感性，通过生物测定获得氯虫苯甲??酰胺、高效氯氰菊酯和阿维菌素对ＵＡＳ－?ＣＹＰ６ＢＧ１品系的ＬＣ５〇，然后分别用ＬＣ５Ｑ的氯虫苯甲酰胺、??高效氯氰菊酯和阿维歯素分别处理三个果蝇品系。结果显示，与ＡＣｔｉｎ－Ｇａｌ４品系和ＵＡＳ－?ＣＹＰ６ＢＧ１??两个对照品系相比，过表达Ｃ７Ａ５ＳＧ７的转基因果蝇品系Ａｃｔｉｎ－Ｇａｌ４＞?ＵＡＳ－?ＣＹＰ６ＢＧ１对氯虫苯甲??酰胺和高效氯氰菊酯的耐药性均明显提高，死亡率分别下降了２３．２％和２１．５％。而阿维菌素处理后??三个品系的死亡率没有显著差异
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【参考文献】：
期刊论文
[1]小菜蛾抗性机理及可持续防抗对策[J]. 苏文敏,徐丽,郁东航,郁建飞. 长江蔬菜. 2016(08)
[2]昆虫对双酰胺类杀虫剂抗性机制研究进展[J]. 李秀霞,梁沛,高希武. 植物保护学报. 2015(04)
[3]转飞蝗CYP408B1和CYP409A1基因果蝇品系对杀虫剂的敏感性[J]. 高翠娥,张建琴,张徐波,张建珍,封云涛,吴海花,马恩波. 中国农业科学. 2015(06)
[4]小菜蛾不同抗性品系对杀虫剂的抗药性测定[J]. 程英,李文红,金剑雪,李凤良. 西南农业学报. 2014(03)
[5]氯虫苯甲酰胺对菜青虫鱼尼丁受体基因表达量的影响[J]. 邓放,周小毛. 湖南农业科学. 2014(07)
[6]华中地区小菜蛾对9种杀虫剂的抗药性测定[J]. 夏耀民,鲁艳辉,朱勋,申君,游红,李建洪. 中国蔬菜. 2013(22)
[7]shMRE11质粒转染对BEL7402/5-FU肝癌细胞耐药性的影响[J]. 范芳,耿磊,李长福. 细胞与分子免疫学杂志. 2013(10)
[8]氯虫苯甲酰胺对小菜蛾鱼尼丁受体基因mRNA表达量的影响[J]. 孙丽娜,杨代斌,芮昌辉,崔丽,袁会珠. 农药学学报. 2012(02)
[9]MicroRNA及其在昆虫学中的研究进展[J]. 梁沛,高希武. 应用昆虫学报. 2012(02)
[10]华南小菜蛾田间种群对氯虫苯甲酰胺已产生严重抗性[J]. 胡珍娣,陈焕瑜,李振宇,张德雍,尹飞,林庆胜,包华理,周小毛,冯夏. 广东农业科学. 2012(01)
博士论文
[1]小菜蛾对氯虫苯甲酰胺抗性的分子机制[D]. 郭磊.中国农业大学 2014
硕士论文
[1]杀虫剂对斜纹夜蛾UDP-葡萄糖基转移酶活性的影响[D]. 娄琳琳.南京农业大学 2014
本文编号：2954369
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