柑橘黄龙病菌和甘薯茎腐病菌单克隆抗体的制备及应用
发布时间：2021-01-10 21:48
植物细菌性病害是一类非常重要的植物病害,世界上已经报道的植物细菌性病害有500多种,我国记录的细菌病害有150种以上。植物细菌病害病原细菌可危害农作物、蔬菜、花卉、果树、林木和药用植物等。其中由柑橘黄龙病菌（Candidatus liberibacter asiaticus）引起的柑橘黄龙病（Citrus huanglongbing,HLB）和达旦提狄克氏菌（Dickeyadadantii）引起的甘薯茎腐病（Stem and root rot desease of sweet potato）在中国地区爆发,造成严重的经济损失。建立快速、灵敏的检测技术是这两种植物细菌病害诊断和防控的关键。血清学检测技术操作简单、特异性好、灵敏度高,适合大规模样品检测。因此,该技术在植物细菌病害的诊断和检测中广泛应用。但目前国内外还没有具有特异性和广谱性的柑橘黄龙病菌单抗,也没有检测甘薯茎腐病菌的血清学技术报道。为此,本论文分别制备了抗柑橘黄龙病菌和抗甘薯茎腐病菌的单克隆抗体,并以单克隆抗体为核心分别建立了快速、可靠地检测这两种病原菌的血清学技术,为这两种细菌病害的诊断与检测、预测预警和科学防控提供技术支...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．?１世界柑橘黄龙病的分布（引自高玉霞，２０１５）??
柑橘黄龙病在柑橘果树上造成的症状表现为：初期树梢嫩叶表现缺绿状，后??期叶片遐绿黄化，伴随着叶脉肿突，产生黄绿相间的斑驳，再长的新梢叶片细狭??长，呈缺锌症状（图１．２?Ｃ）；感染了黄龙病的植株的花期会提前，花量变多，??但很容易脱落，且坐果率低，有的病树开花时间不确定（黄丽，２０１３）；初期的果??实不显现出明显的症状，果实成熟期提前，果实出现脱落，且果实较小，果皮较??硬且着色不正常，形成青鼻果、畸形果、软果等（图１．２?Ｂ），导致果实品质和??产量下降，从而造成了巨大的经济损失（范怀忠等，１９８６?）。当叶片黄化脱落，树??势生长变衰弱时，伴随着根部慢慢开始腐烂，腐烂的根部表层与下层组织脱落分??离，到了后期主侧根逐渐全部腐烂，木质部变成黑色（白华菊等，２００９）。通过对染??病植株叶片的亚显微结构观察，发现细胞结构出现明显变化：叶绿体结构中淀粉??粒膨大
在柑橘黄龙病检测取样时，应该选取老熟叶的叶柄，切割含有中脉及其??附近少量组织，病原菌提取时可取叶片中下部侧脉（苏华楠等，２０１４）。因为病??原菌主要集中分布在主叶脉，叶肉和细小侧脉中病原菌含量很低（图１．３）。??敷??（＇Ｉ．ａｓ?ｃｏｎｔｅｎｔ??诋Ｌｏｗ??图１．３?ＨＬＢ病原在柑橘叶片中的主要分布及含量示意图（引自苏华楠等，２０１４）??Ｆｉｇ．?１．３?Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ?Ｌｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒ?ａｓｉａｔｉｃｕｓ?ｉｎ?ｃｉｔｒｕｓ?ｌｅａｖｅｓ?ｆｒｏｍ?Ｓｕ??ｅｔ?ａｌ．?（２０１４）??１．?３．?３柑橘黄龙病病原菌的寄主??柑橘黄龙病菌的寄主多为芸香科植物，能感染如柑橘属）、枳属??（Ｐ０Ａ７Ｃ／／／１／５１?／厂办／／（７如）和金柑属（／＾广／＂；＾／／“?＃／；．）等植物（Ｍｉｙａｋａｗａ?ｅｔ?ａｌ．，?１９９０）。??除此之外，酒饼簕（ｉＳｅｖｅｒ／＞７／ｆ７?６ｗｘ／／ｏ／／Ｇ）?（Ｈｕｎｇ?ｅｔａｌ．，２００１）、开普板栗（ＣＡｍｓ＾ａ??）、九里香（）（Ｈｕｎｇ?ｅｔ?ａｌ．，２００?丨）和黄皮（??臓）（Ｇａｍｉｅｒｅｔａｌ．，１９８３）也都可成为柑橘黄龙病菌的寄主。除了芸香科植??物
【参考文献】：
期刊论文
[1]柑橘黄龙病发病规律及防控关键技术要点[J]. 黄源. 南方农业. 2018(15)
[2]柑橘黄龙病快速诊断与检测技术研究进展[J]. 肖翠,廖晶晶,何利刚,仝铸,吴黎明,王志静,蒋迎春,黄咏明,孙中海. 农业科技通讯. 2017(12)
[3]甘薯茎腐病防治初探[J]. 卢璐,张敏荣,杨晓,余继华,陶健. 浙江农业科学. 2017(09)
[4]柑橘黄龙病碘—淀粉法快速检测技术优化[J]. 王许会,郭洋洋,全金成,张宇宏,陈慈相,邱栋梁,毛润乾. 福建农林大学学报(自然科学版). 2017(04)
[5]甘薯茎腐病的发生危害及防控对策[J]. 杨晓,张敏荣,余继华,卢璐,陶健. 农业与技术. 2017(02)
[6]柑橘黄龙病分子生物学检测方法研究进展[J]. 卢乃会,李强有,张曼其,何红,黄勤知,赵丽宏. 现代农业科技. 2016(12)
[7]柑橘黄龙病症状与“Candidatus Liberibacter asiaticus”PCR检测结果的相关性分析[J]. 许美容,陈燕玲,邓晓玲. 植物病理学报. 2016(03)
[8]台州新发现甘薯茎腐病[J]. 张敏荣,余继华,卢璐,陶健. 植物检疫. 2016(03)
[9]甜瓜细菌性叶枯病菌胶体金ICA检测试纸条的研发与应用[J]. 缪林玉,王利民,田艳丽,赵玉强,胡白石. 农业生物技术学报. 2016(01)
[10]柑橘黄龙病研究概况[J]. 陈凯男,李充璧. 浙江农业科学. 2015(07)
硕士论文
[1]小麦矮缩病毒和大麦黄矮病毒PAV株系基于单克隆抗体的血清学检测技术[D]. 张明皓.浙江大学 2017
[2]苹果茎痘病毒梨分离物和苹果茎沟病毒基于单克隆抗体的血清学检测技术[D]. 孙朱元吉.浙江大学 2017
[3]马铃薯S病毒和马铃薯Y病毒单克隆抗体的制备及应用[D]. 宋革.浙江大学 2016
[4]大麦黄矮病毒GAV株系和小麦黄花叶病毒单克隆抗体的制备及其应用[D]. 李娜.浙江大学 2015
[5]柑橘碎叶病毒和香蕉束顶病毒单克隆抗体的制备及其检测应用[D]. 宋西娇.浙江大学 2014
[6]柑橘黄龙病LAMP检测方法的建立及病原菌亚洲种种群分化研究[D]. 黄丽.西南大学 2013
[7]水稻矮缩病毒和水稻黑条矮缩病毒单克隆抗体的制备及其应用[D]. 倪跃群.浙江大学 2013
[8]南方水稻黑条矮缩病毒和中国小麦花叶病毒单克隆抗体的制备及其应用[D]. 刘欢.浙江大学 2013
[9]番茄黄化曲叶病毒和黄瓜绿斑驳花叶病毒单克隆抗体的制备及其检测应用[D]. 尚海丽.浙江大学 2011
[10]应用荧光定量PCR技术研究亚洲韧皮部杆菌在寄主体内的动态变化及分布[D]. 胡浩.重庆大学 2007
本文编号：2969472
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．?１世界柑橘黄龙病的分布（引自高玉霞，２０１５）??
柑橘黄龙病在柑橘果树上造成的症状表现为：初期树梢嫩叶表现缺绿状，后??期叶片遐绿黄化，伴随着叶脉肿突，产生黄绿相间的斑驳，再长的新梢叶片细狭??长，呈缺锌症状（图１．２?Ｃ）；感染了黄龙病的植株的花期会提前，花量变多，??但很容易脱落，且坐果率低，有的病树开花时间不确定（黄丽，２０１３）；初期的果??实不显现出明显的症状，果实成熟期提前，果实出现脱落，且果实较小，果皮较??硬且着色不正常，形成青鼻果、畸形果、软果等（图１．２?Ｂ），导致果实品质和??产量下降，从而造成了巨大的经济损失（范怀忠等，１９８６?）。当叶片黄化脱落，树??势生长变衰弱时，伴随着根部慢慢开始腐烂，腐烂的根部表层与下层组织脱落分??离，到了后期主侧根逐渐全部腐烂，木质部变成黑色（白华菊等，２００９）。通过对染??病植株叶片的亚显微结构观察，发现细胞结构出现明显变化：叶绿体结构中淀粉??粒膨大
在柑橘黄龙病检测取样时，应该选取老熟叶的叶柄，切割含有中脉及其??附近少量组织，病原菌提取时可取叶片中下部侧脉（苏华楠等，２０１４）。因为病??原菌主要集中分布在主叶脉，叶肉和细小侧脉中病原菌含量很低（图１．３）。??敷??（＇Ｉ．ａｓ?ｃｏｎｔｅｎｔ??诋Ｌｏｗ??图１．３?ＨＬＢ病原在柑橘叶片中的主要分布及含量示意图（引自苏华楠等，２０１４）??Ｆｉｇ．?１．３?Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ?Ｌｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒ?ａｓｉａｔｉｃｕｓ?ｉｎ?ｃｉｔｒｕｓ?ｌｅａｖｅｓ?ｆｒｏｍ?Ｓｕ??ｅｔ?ａｌ．?（２０１４）??１．?３．?３柑橘黄龙病病原菌的寄主??柑橘黄龙病菌的寄主多为芸香科植物，能感染如柑橘属）、枳属??（Ｐ０Ａ７Ｃ／／／１／５１?／厂办／／（７如）和金柑属（／＾广／＂；＾／／“?＃／；．）等植物（Ｍｉｙａｋａｗａ?ｅｔ?ａｌ．，?１９９０）。??除此之外，酒饼簕（ｉＳｅｖｅｒ／＞７／ｆ７?６ｗｘ／／ｏ／／Ｇ）?（Ｈｕｎｇ?ｅｔａｌ．，２００１）、开普板栗（ＣＡｍｓ＾ａ??）、九里香（）（Ｈｕｎｇ?ｅｔ?ａｌ．，２００?丨）和黄皮（??臓）（Ｇａｍｉｅｒｅｔａｌ．，１９８３）也都可成为柑橘黄龙病菌的寄主。除了芸香科植??物
【参考文献】：
期刊论文
[1]柑橘黄龙病发病规律及防控关键技术要点[J]. 黄源. 南方农业. 2018(15)
[2]柑橘黄龙病快速诊断与检测技术研究进展[J]. 肖翠,廖晶晶,何利刚,仝铸,吴黎明,王志静,蒋迎春,黄咏明,孙中海. 农业科技通讯. 2017(12)
[3]甘薯茎腐病防治初探[J]. 卢璐,张敏荣,杨晓,余继华,陶健. 浙江农业科学. 2017(09)
[4]柑橘黄龙病碘—淀粉法快速检测技术优化[J]. 王许会,郭洋洋,全金成,张宇宏,陈慈相,邱栋梁,毛润乾. 福建农林大学学报(自然科学版). 2017(04)
[5]甘薯茎腐病的发生危害及防控对策[J]. 杨晓,张敏荣,余继华,卢璐,陶健. 农业与技术. 2017(02)
[6]柑橘黄龙病分子生物学检测方法研究进展[J]. 卢乃会,李强有,张曼其,何红,黄勤知,赵丽宏. 现代农业科技. 2016(12)
[7]柑橘黄龙病症状与“Candidatus Liberibacter asiaticus”PCR检测结果的相关性分析[J]. 许美容,陈燕玲,邓晓玲. 植物病理学报. 2016(03)
[8]台州新发现甘薯茎腐病[J]. 张敏荣,余继华,卢璐,陶健. 植物检疫. 2016(03)
[9]甜瓜细菌性叶枯病菌胶体金ICA检测试纸条的研发与应用[J]. 缪林玉,王利民,田艳丽,赵玉强,胡白石. 农业生物技术学报. 2016(01)
[10]柑橘黄龙病研究概况[J]. 陈凯男,李充璧. 浙江农业科学. 2015(07)
硕士论文
[1]小麦矮缩病毒和大麦黄矮病毒PAV株系基于单克隆抗体的血清学检测技术[D]. 张明皓.浙江大学 2017
[2]苹果茎痘病毒梨分离物和苹果茎沟病毒基于单克隆抗体的血清学检测技术[D]. 孙朱元吉.浙江大学 2017
[3]马铃薯S病毒和马铃薯Y病毒单克隆抗体的制备及应用[D]. 宋革.浙江大学 2016
[4]大麦黄矮病毒GAV株系和小麦黄花叶病毒单克隆抗体的制备及其应用[D]. 李娜.浙江大学 2015
[5]柑橘碎叶病毒和香蕉束顶病毒单克隆抗体的制备及其检测应用[D]. 宋西娇.浙江大学 2014
[6]柑橘黄龙病LAMP检测方法的建立及病原菌亚洲种种群分化研究[D]. 黄丽.西南大学 2013
[7]水稻矮缩病毒和水稻黑条矮缩病毒单克隆抗体的制备及其应用[D]. 倪跃群.浙江大学 2013
[8]南方水稻黑条矮缩病毒和中国小麦花叶病毒单克隆抗体的制备及其应用[D]. 刘欢.浙江大学 2013
[9]番茄黄化曲叶病毒和黄瓜绿斑驳花叶病毒单克隆抗体的制备及其检测应用[D]. 尚海丽.浙江大学 2011
[10]应用荧光定量PCR技术研究亚洲韧皮部杆菌在寄主体内的动态变化及分布[D]. 胡浩.重庆大学 2007
本文编号：2969472
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