基于寡核苷酸信号放大的有机磷农药多残留荧光免疫分析方法研究
发布时间：2021-01-17 19:35
农药残留受到各国政府与消费者关注,其检测技术已受到越来越多的重视。因此,建立有效的农药残留检测方法,特别是灵敏、准确、快速、简便的检测方法,对保护生态环境、消费者健康具有重要意义。本研究以间接竞争免疫分析为基础,结合胶体金和寡核苷酸链信号放大技术,荧光标记寡核苷酸链探针提供检测信号,先后建立了针对三唑磷农药单残留和三唑磷、对硫磷、毒死蜱农药多残留检测的寡核苷酸信号放大免疫分析方法。主要内容如下:采用柠檬酸钠还原法,合成了粒径均一、形状规则、分散性良好、浓度约为9.9 nM的胶体金。将农药单克隆抗体和荧光标记的寡核苷酸链标记在胶体金表面,对标记过程的稳定剂浓度、老化时间、抗体浓度、寡核苷酸序列等条件进行优化,得到寡核苷酸荧光探针。利用间接竞争模式,建立了基于寡核苷酸信号放大的三唑磷农药荧光免疫分析方法,并对方法的分析条件如探针与半抗原的工作浓度、二硫苏糖醇（DTT）工作条件、甲醇浓度等进行了优化。方法在0.01–20μg L–1范围内线性关系良好,检出限为6 ng L–1。利用本方法进行了水、大米、黄瓜、甘蓝和苹果基质添加回收试验。方法的平均回...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
酶催化与其他放大技术结合的电化学免疫分析方法
中国农业科学院硕士学位论文 第一章 引言物素标记的 AP 通过亲和素与夹心结构相结合，形成第一级信号放大，在 AP 酶催化作用下，电活性对氨基苯基磷酸酯（PAPP）底物迅速水解成电活性对氨基苯酚（PAP），在电极表面氧化成对醌亚胺（PQI）。在心肌黄酶（DI）存在下，PQI 分解为 PAP，导致 PAP 的可逆循环，形成第二级信号放大。然后，DI 的氧化状态通过其天然底物烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）再生成其还原天然状态，形成第三级信号放大。在以上几种信号放大作用下，该放法对人 IgG 的检出限低至 3.5×10–5g mL–1。
图 1.4 几种基于纳米材料信号放大技术的传感器Fig. 1.4 Sensors based on signal amplification of nanoparticles链酸链进行信号放大时，一般需要结合纳米材料比表面积大的特米颗粒上，通过在链的另一端标记荧光、酶等信号分子或者将合酶链式反应、生物芯片银染、循环放大等技术实现信号放大环境污染物等的高灵敏度检测（Chen et al, 2018; Rasheed et a等将巯基修饰的短链 DNA 和检测抗体标记在胶体金表面，通获抗体与抗原结合形成三明治夹心结构，结合 RCA 循环实现 al, 2010）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]纳米材料的制备及其表征[J]. 耿新乐,魏强. 化学世界. 2017(12)
[2]农药内分泌干扰效应研究进展[J]. 方琪,马彦博,张思远,焦必宁. 生态毒理学报. 2017(01)
[3]果品中有机磷农药联合毒性研究进展[J]. 张思远,方琪,焦必宁. 果树学报. 2017(01)
[4]分散固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法测定水稻和土壤中的福美双与甲霜灵残留[J]. 江泽军,张鹏,李永飞,杜鹏飞,陈鸽,金茂俊,王静. 农药学学报. 2015(03)
[5]二甲氧基硫代磷酸酯类农药多残留免疫分析方法研究[J]. 李永祥,徐振林,王弘,雷红涛,孙远明,沈丹,杨金易,沈玉栋. 分析化学. 2010(11)
[6]农药使用情况调查、存在的问题及建议[J]. 周真,路奎远,于辉,訾婷,李丽春,刘文兵. 农药科学与管理. 2010(04)
[7]蔬菜农药残留超标对人体健康的危害及预防[J]. 于娜,邹琳琳,孟红英. 现代农业科技. 2010(04)
[8]农药残留的危害及其暴露研究进展[J]. 崔伟伟,张强斌,朱先磊. 安徽农业科学. 2010(02)
[9]我国水环境农药污染现状及健康影响研究进展[J]. 孙肖瑜,王静,金永堂. 环境与健康杂志. 2009(07)
[10]有机磷农药的联合毒性研究进展[J]. 文一,潘家荣. 环境与健康杂志. 2007(07)
博士论文
[1]三唑磷农药生物条形码免疫分析方法研究[D]. 杜鹏飞.中国农业科学院 2017
本文编号：2983469
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
酶催化与其他放大技术结合的电化学免疫分析方法
中国农业科学院硕士学位论文 第一章 引言物素标记的 AP 通过亲和素与夹心结构相结合，形成第一级信号放大，在 AP 酶催化作用下，电活性对氨基苯基磷酸酯（PAPP）底物迅速水解成电活性对氨基苯酚（PAP），在电极表面氧化成对醌亚胺（PQI）。在心肌黄酶（DI）存在下，PQI 分解为 PAP，导致 PAP 的可逆循环，形成第二级信号放大。然后，DI 的氧化状态通过其天然底物烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）再生成其还原天然状态，形成第三级信号放大。在以上几种信号放大作用下，该放法对人 IgG 的检出限低至 3.5×10–5g mL–1。
图 1.4 几种基于纳米材料信号放大技术的传感器Fig. 1.4 Sensors based on signal amplification of nanoparticles链酸链进行信号放大时，一般需要结合纳米材料比表面积大的特米颗粒上，通过在链的另一端标记荧光、酶等信号分子或者将合酶链式反应、生物芯片银染、循环放大等技术实现信号放大环境污染物等的高灵敏度检测（Chen et al, 2018; Rasheed et a等将巯基修饰的短链 DNA 和检测抗体标记在胶体金表面，通获抗体与抗原结合形成三明治夹心结构，结合 RCA 循环实现 al, 2010）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]纳米材料的制备及其表征[J]. 耿新乐,魏强. 化学世界. 2017(12)
[2]农药内分泌干扰效应研究进展[J]. 方琪,马彦博,张思远,焦必宁. 生态毒理学报. 2017(01)
[3]果品中有机磷农药联合毒性研究进展[J]. 张思远,方琪,焦必宁. 果树学报. 2017(01)
[4]分散固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法测定水稻和土壤中的福美双与甲霜灵残留[J]. 江泽军,张鹏,李永飞,杜鹏飞,陈鸽,金茂俊,王静. 农药学学报. 2015(03)
[5]二甲氧基硫代磷酸酯类农药多残留免疫分析方法研究[J]. 李永祥,徐振林,王弘,雷红涛,孙远明,沈丹,杨金易,沈玉栋. 分析化学. 2010(11)
[6]农药使用情况调查、存在的问题及建议[J]. 周真,路奎远,于辉,訾婷,李丽春,刘文兵. 农药科学与管理. 2010(04)
[7]蔬菜农药残留超标对人体健康的危害及预防[J]. 于娜,邹琳琳,孟红英. 现代农业科技. 2010(04)
[8]农药残留的危害及其暴露研究进展[J]. 崔伟伟,张强斌,朱先磊. 安徽农业科学. 2010(02)
[9]我国水环境农药污染现状及健康影响研究进展[J]. 孙肖瑜,王静,金永堂. 环境与健康杂志. 2009(07)
[10]有机磷农药的联合毒性研究进展[J]. 文一,潘家荣. 环境与健康杂志. 2007(07)
博士论文
[1]三唑磷农药生物条形码免疫分析方法研究[D]. 杜鹏飞.中国农业科学院 2017
本文编号：2983469
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/dzwbhlw/2983469.html
