基于DYMEX模型的小菜蛾种群动态分析及P-糖蛋白功能研究
发布时间：2021-02-19 08:08
小菜蛾Plutella xylostella（L.）是一种危害十字花科作物的世界性害虫。自上世纪80年代开始,阿维菌素由于被大量用于农业害虫防治（包括小菜蛾）而导致高水平抗性的产生。小菜蛾具有迁飞的特性,尽管已有大量的研究阐述了其在我国北方的抗药性现状和部分抗性机制,但是对于持续的种群动态研究还很少。本研究采用性诱剂对我国北方四个地区（北京昌平区和海淀区,河北宣化县和张北县）小菜蛾进行了长期种群监测,实地调研掌握了上述地区十字花科蔬菜种植的田间实际管理情况,然后基于DYMEX模型,对诱捕数据和田间种植模式进行了季节性物候和种群趋势丰度模拟分析,旨在明确我国北方地区小菜蛾种群的来源和相关影响因素。为了进一步明确小菜蛾对阿维菌素的抗性机制,在前期研究基础上,采用RNA干扰技术研究了P-糖蛋白（P-glycoprotein,Pgp）基因在小菜蛾对阿维菌素抗性中的作用,旨在阐明小菜蛾对阿维菌素的抗性机制,延缓阿维菌素类药剂的使用寿命,为农产品安全生产提供技术参考。采用性信息素诱捕技术对北京海淀区和昌平地区（2009年-2015年）、河北宣化县和张北县（2009年-2014年）田间小菜蛾的种群动...
【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 引言
1.1 种群动态模型
1.1.1 种群动态研究的发展
1.1.2 种群动态模型的研究进展
1.2 性诱剂在昆虫中的应用
1.2.1 性诱剂的发展与应用
1.2.2 性诱剂在小菜蛾种群动态中的应用
1.3 小菜蛾的抗药性
1.3.1 小菜蛾抗性现状
1.3.2 小菜蛾抗性机理研究
1.3.2.1 代谢抗性
1.3.2.2 靶标位点突变
1.3.2.3 表皮穿透作用降低
1.3.2.4 ABC转运蛋白
1.3.3 小菜蛾对阿维菌素抗性
1.3.4 阿维菌素抗性机制
1.3.5 小菜蛾阿维菌素抗性发展
1.4 RNA干扰技术
1.4.1 RNA干扰作用原理
1.4.2 RNA干扰技术的应用
1.4.2.1 RNA干扰技术在医学中的应用
1.4.2.2 RNA干扰技术在昆虫防治领域的应用
1.4.2.3 RNA干扰技术在昆虫抗药性中的应用
1.5 本研究的内容和目的意义
1.5.1 研究的内容和方法
1.5.2 技术路线
1.5.3 研究的目的意义
第二章 基于DYMEX模型的小菜蛾种群动态分析
2.1 试验地点概况
2.2 试验材料
2.3 试验方法
2.3.1 气象资料获取方法
2.3.2 小菜蛾田间实际管理数据收集
2.3.3 性诱剂诱捕田间小菜蛾试验方法
2.3.4 不同模块模拟分析方法
2.3.4.1 DYMEX分析模型关键组成部分
2.3.4.2 作物模块分析方法
2.3.4.3 小菜蛾生活史模块分析方法
2.3.4.4 杀虫剂的施用模块分析方法
2.3.4.5 小菜蛾种群场景模拟分析方法
2.4 结果与分析
2.4.1 小菜蛾田间防治
2.4.2 小菜蛾田间发生动态
2.4.3 小菜蛾春季迁入量与全年发生量的关系
2.4.4 种群动态模拟
2.4.4.1 田间种植模式模拟
2.4.4.2 季节性物候学模拟
2.4.4.3 种群丰度趋势模拟
2.4.4.4 基于四种场景小菜蛾种群数量模拟
2.5 结论与讨论
第三章 PxPgp1基因在小菜蛾对阿维菌素抗性中的作用
3.1 试验材料和仪器
3.1.1 供试昆虫
3.1.2 供试蔬菜
3.1.3 试验试剂和试剂盒
3.1.3.1 生物测定测药剂
3.1.3.2 主要试剂及试剂盒
3.1.4 主要仪器
3.1.5 培养基及常用溶液
3.1.6 引物和测序
3.1.7 生物信息学工具
3.2 试验方法
3.2.1 小菜蛾室内饲养及阿维菌素汰选方法
3.2.1.1 小菜蛾的室内饲养
3.2.1.2 阿维菌素抗性小菜蛾的汰选
3.2.1.3 阿维菌素对小菜蛾的生物测定
3.2.2 小菜蛾PxPgp1基因的RNA干扰方法
3.2.2.1 RNA的提取
3.2.2.2 cDNA的合成
3.2.2.3 dsRNA合成引物的筛选
3.2.2.4 目的产物的扩增程序
3.2.2.5 PCR产物的回收与纯化
3.2.2.6 PCR产物与pEASY-T5载体的连接、转化
3.2.2.7 阳性克隆检测
3.2.2.8 序列测定
3.2.2.9 dsRNA的体外合成
3.2.2.10 dsRNA的显微注射
3.2.2.11 基因相对表达量分析
3.2.2.12 小菜蛾PxPgp1基因干扰后对阿维菌素的敏感性测定
3.3 结果与分析
3.3.1 小菜蛾阿维菌素抗性筛选
3.3.2 小菜蛾PxPgp1基因的RNA干扰结果
3.3.2.1 小菜蛾RNA的提取
3.3.2.2 dsEGFP的DNA模板
3.3.2.3 小菜蛾PxPgp1基因RNA干扰引物筛选
3.3.2.4 小菜蛾PxPgp1基因的RNA干扰
3.3.2.5 小菜蛾PxPgp1基因沉默后对阿维菌素的敏感性
3.4 结论与讨论
第四章 全文结论
致谢
参考文献
附录
图版
本文编号：3040840
【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 引言
1.1 种群动态模型
1.1.1 种群动态研究的发展
1.1.2 种群动态模型的研究进展
1.2 性诱剂在昆虫中的应用
1.2.1 性诱剂的发展与应用
1.2.2 性诱剂在小菜蛾种群动态中的应用
1.3 小菜蛾的抗药性
1.3.1 小菜蛾抗性现状
1.3.2 小菜蛾抗性机理研究
1.3.2.1 代谢抗性
1.3.2.2 靶标位点突变
1.3.2.3 表皮穿透作用降低
1.3.2.4 ABC转运蛋白
1.3.3 小菜蛾对阿维菌素抗性
1.3.4 阿维菌素抗性机制
1.3.5 小菜蛾阿维菌素抗性发展
1.4 RNA干扰技术
1.4.1 RNA干扰作用原理
1.4.2 RNA干扰技术的应用
1.4.2.1 RNA干扰技术在医学中的应用
1.4.2.2 RNA干扰技术在昆虫防治领域的应用
1.4.2.3 RNA干扰技术在昆虫抗药性中的应用
1.5 本研究的内容和目的意义
1.5.1 研究的内容和方法
1.5.2 技术路线
1.5.3 研究的目的意义
第二章 基于DYMEX模型的小菜蛾种群动态分析
2.1 试验地点概况
2.2 试验材料
2.3 试验方法
2.3.1 气象资料获取方法
2.3.2 小菜蛾田间实际管理数据收集
2.3.3 性诱剂诱捕田间小菜蛾试验方法
2.3.4 不同模块模拟分析方法
2.3.4.1 DYMEX分析模型关键组成部分
2.3.4.2 作物模块分析方法
2.3.4.3 小菜蛾生活史模块分析方法
2.3.4.4 杀虫剂的施用模块分析方法
2.3.4.5 小菜蛾种群场景模拟分析方法
2.4 结果与分析
2.4.1 小菜蛾田间防治
2.4.2 小菜蛾田间发生动态
2.4.3 小菜蛾春季迁入量与全年发生量的关系
2.4.4 种群动态模拟
2.4.4.1 田间种植模式模拟
2.4.4.2 季节性物候学模拟
2.4.4.3 种群丰度趋势模拟
2.4.4.4 基于四种场景小菜蛾种群数量模拟
2.5 结论与讨论
第三章 PxPgp1基因在小菜蛾对阿维菌素抗性中的作用
3.1 试验材料和仪器
3.1.1 供试昆虫
3.1.2 供试蔬菜
3.1.3 试验试剂和试剂盒
3.1.3.1 生物测定测药剂
3.1.3.2 主要试剂及试剂盒
3.1.4 主要仪器
3.1.5 培养基及常用溶液
3.1.6 引物和测序
3.1.7 生物信息学工具
3.2 试验方法
3.2.1 小菜蛾室内饲养及阿维菌素汰选方法
3.2.1.1 小菜蛾的室内饲养
3.2.1.2 阿维菌素抗性小菜蛾的汰选
3.2.1.3 阿维菌素对小菜蛾的生物测定
3.2.2 小菜蛾PxPgp1基因的RNA干扰方法
3.2.2.1 RNA的提取
3.2.2.2 cDNA的合成
3.2.2.3 dsRNA合成引物的筛选
3.2.2.4 目的产物的扩增程序
3.2.2.5 PCR产物的回收与纯化
3.2.2.6 PCR产物与pEASY-T5载体的连接、转化
3.2.2.7 阳性克隆检测
3.2.2.8 序列测定
3.2.2.9 dsRNA的体外合成
3.2.2.10 dsRNA的显微注射
3.2.2.11 基因相对表达量分析
3.2.2.12 小菜蛾PxPgp1基因干扰后对阿维菌素的敏感性测定
3.3 结果与分析
3.3.1 小菜蛾阿维菌素抗性筛选
3.3.2 小菜蛾PxPgp1基因的RNA干扰结果
3.3.2.1 小菜蛾RNA的提取
3.3.2.2 dsEGFP的DNA模板
3.3.2.3 小菜蛾PxPgp1基因RNA干扰引物筛选
3.3.2.4 小菜蛾PxPgp1基因的RNA干扰
3.3.2.5 小菜蛾PxPgp1基因沉默后对阿维菌素的敏感性
3.4 结论与讨论
第四章 全文结论
致谢
参考文献
附录
图版
本文编号：3040840
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