甘露醇、山梨醇增强拮抗酵母菌耐受性及生防效力的研究

发布时间：2021-02-23 16:24

　　本研究的目的是确定糖醇（甘露醇或山梨醇）对拮抗酵母菌Debaryomyces hansenii的抗逆性和生物防治效力的影响。其中包含:测定拮抗酵母菌D.hansenii在不同逆境（氧化、高温,盐）条件下的存活率;利用甘露醇或山梨醇预处理酵母细胞,随后暴露于高温,氧化（H₂O₂）胁迫下的细胞存活率;甘露醇或山梨醇对酵母细胞D.hansenii中抗氧化酶的诱导作用,其中包括过氧化氢酶（CAT）,超氧化物歧化酶（SOD）;定量RT-q PCR测定甘露醇或山梨醇预处理对D.hansenii抗氧化基因表达量的影响,以及在苹果伤口和体外p H 4.0的酵母蛋白胨葡萄糖培养基（YPD）中酵母细胞的种群动态;D.hansenii预处理细胞对苹果的青霉病和灰霉病的生防效果。研究结果表明,与没有预处理的对照组酵母细胞相比,0.1 M甘露醇或0.1 M山梨醇预处理增强了D.hansenii对随后的氧化和高温胁迫的耐受性。当酵母细胞暴露于随后的氧化逆境（30 m M H₂O₂）或高温逆境（40.5^oC... 

【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1.1 拮抗酵母菌的生防研究概述
        1.1.1 拮抗酵母菌的简介
        1.1.2 拮抗酵母菌的生物防治研究
    1.2 水果采后的主要病害
        1.2.1 青霉病概述
        1.2.2 灰霉病概述
    1.3 拮抗酵母菌的逆境耐受性
        1.3.1 氧化逆境
        1.3.2 高温逆境
        1.3.3 盐逆境
    1.4 甘露醇与山梨醇的概述
        1.4.1 甘露醇概述
        1.4.2 山梨醇概述
    1.5 本实验研究的目的与意义
        1.5.1 实验研究目的
        1.5.2 实验研究意义
第二章 甘露醇、山梨醇提高拮抗酵母菌耐受性的研究
    2.1 实验材料
        2.1.1 拮抗酵母菌
        2.1.2 主要试剂与试剂盒
            2.1.2.1 常用生化试剂
            2.1.2.2 主要试剂盒
        2.1.3 主要仪器
        2.1.4 培养基及试剂配制
            2.1.4.1 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）
            2.1.4.2 酵母蛋白胨葡萄糖培养基（YPD）
            2.1.4.3 磷酸钾缓冲液
            2.1.4.4 2',7'-二氯氢化荧光素乙二脂荧光染料液配制
            2.1.4.5 蛋白定量试剂及配制
            2.1.4.6 过氧化氢酶（CAT）试剂组成与配制
            2.1.4.7 超氧化物歧化酶（SOD）试剂组成与配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 拮抗酵母菌在不同逆境下的存活率测定
            2.2.1.1 高温逆境
            2.2.1.2 氧化逆境
            2.2.1.3 盐逆境处理
        2.2.2 甘露醇、山梨醇对拮抗酵母菌预处理
        2.2.3 甘露醇、山梨醇预处理对拮抗酵母菌在逆境下的存活率影响
            2.2.3.1 致死氧化条件下存活率测定
            2.2.3.2 致死高温条件下存活率测定
        2.2.4 甘露醇、山梨醇预处理对拮抗酵母细胞内活性氧（ROS）积累的影响
        2.2.5 甘露醇、山梨醇对拮抗酵母菌生理生化指标变化的影响
            2.2.5.1 粗酶液提取
            2.2.5.2 考马斯亮蓝法测定蛋白含量
            2.2.5.3 拮抗酵母细胞内CAT酶活性测定
            2.2.5.4 拮抗酵母细胞内SOD酶活性测定
        2.2.6 甘露醇、山梨醇对拮抗酵母菌抗性基因表达量的影响
            2.2.6.1 拮抗酵母菌总RNA的提取
            2.2.6.2 mRNA反转录为cDNA
            2.2.6.3 RT-q PCR分析甘露醇、山梨醇对拮抗酵母菌抗性基因表达量的影响
        2.2.7 甘露醇、山梨醇预处理对拮抗酵母菌种群数量增长速度的影响
            2.2.7.1 拮抗酵母菌在pH=4.0的YPD培养基中的生长速度
            2.2.7.2 拮抗酵母在苹果伤口上的繁殖速度
        2.2.8 数据分析
    2.3 结果分析
        2.3.1 不同逆境对拮抗酵母菌的存活率影响
        2.3.2 甘露醇、山梨醇预处理对拮抗酵母菌逆境条件的存活率影响
        2.3.3 酵母细胞内ROS的积累
        2.3.4 甘露醇、山梨醇对拮抗酵母菌生理生化指标变化的影响
        2.3.5 甘露醇、山梨醇对拮抗酵母菌抗性基因表达量的影响
        2.3.6 甘露醇预处理对拮抗酵母菌种群数量增长速度的影响
        2.3.7 山梨醇预处理对拮抗酵母菌种群数量增长速度的影响
    2.4 讨论
第三章 甘露醇、山梨醇提高拮抗酵母菌生防效力的研究
    3.1 实验材料
        3.1.1 水果
        3.1.2 拮抗酵母菌的活化
        3.1.3 病原菌的活化
    3.2 实验方法
        3.2.1 拮抗酵母菌的预处理
        3.2.2 甘露醇、山梨醇预处理对青霉病的生物防治
        3.2.3 甘露醇、山梨醇预处理对灰霉病的生物防治
    3.3 数据分析
    3.4 实验结果与分析
        3.4.1 拮抗酵母菌对青霉病的生防效果
        3.4.2 拮抗酵母菌对灰霉病的生防效果
    3.5 讨论
第四章 结论与展望
    4.1 结论
    4.2 展望
参考文献
致谢
附录


【参考文献】：
期刊论文
[1]苹果腐败霉菌的拮抗酵母菌筛选鉴定及拮抗机理初探[J]. 刘程惠,吴祎男,胡文忠,王艳颖,田密霞.  食品工业科技. 2018(12)
[2]控制蔬菜污染的措施[J]. 缪晓玲.  闽东农业科技. 2016(03)
[3]葡萄常见病害及防治方法[J]. 高红娟,崔映青.  中国园艺文摘. 2012(09)
[4]拮抗酵母菌对果蔬病害防治的研究进展[J]. 宋金宇,刘程惠,胡文忠,何煜波,富丽萍.  保鲜与加工. 2012(05)

硕士论文
[1]毕赤酵母Pichia anomala SRF对苹果采后青霉病的生防机制研究[D]. 李慧玲.广东海洋大学 2014



本文编号：3047878