广藿香青枯病菌低致病力突变株的遗传稳定性研究

发布时间：2021-04-03 05:59

　　目的对广藿香青枯病菌低致病力突变株进行遗传稳定性评价。方法以广藿香青枯菌菌株PRS-84（对照）及通过Tn5转座子插入获得的低致病力突变株PRS-84-4-7、PRS-84-4-49为供试菌株,分别继代培养至100代;以Tn5转座子上的Kanr基因设计引物,对继代突变株进行PCR验证,并根据Tn5转座子序列设计引物,通过反向PCR检测转座子插入位点,以考察突变株基因组中Tn5转座子的遗传稳定性;通过观察菌体形态,并测定生长曲线、运动性、生物膜形成能力及致病性,考察突变株继代前后表型的变化。结果 Tn5转座子在继代100代的低致病力突变株基因组中仍稳定存在,且插入位点不变;继代对低致病力突变株的菌体形态、生长速率、运动性、生物膜形成能力及致病力没有明显的影响。结论通过Tn5转座子插入突变获得的低致病力突变株具有良好的遗传稳定性,为研发防治广藿香青枯病的生防菌株奠定基础。 

【文章来源】：中药新药与临床药理. 2020,31(08)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

广藿香青枯病菌低致病力突变株基因组中Tn5转座子的遗传稳定性检测

通过革兰氏染色法染色后，观察各供试菌株的菌体形态。由图2可见突变株PRS-84-4-7、PRS-84-4-49与野生菌株PRS-84菌体均呈短杆状，多两个连在一起或单个存在，突变株和野生菌株的菌体形态相似，原代及继代100代菌株的菌体形态无明显变化。3.3 生长曲线测定

生物膜是微生物有组织生长的聚集体。以生物膜形式存在的细菌不同于浮游细菌，它们对恶劣环境及宿主免疫防御机制有很强的抗性。病原菌生物膜形成是重要的致病因子之一[9]。本实验采用结晶紫染色法，分别测定各供试菌株在孔壁形成生物膜的能力。实验结果见图5。与野生菌株PRS-84相比，突变株PRS-84-4-7生物膜形成能力下降，突变株PRS-84-4-49生物膜形成能力无明显变化；各供试菌株继代后与原代相比，生物膜形成能力均稍减弱。图5 供试菌株的生物膜形成能力测定

【参考文献】：
期刊论文
[1]水稻基腐细菌Tn5插入突变体库的构建及其致病相关突变体的筛选[J]. 谭秀明,陈雪风,林敏怡,刘琼光.  华中农业大学学报. 2012(02)
[2]广藿香青枯病菌的分离培养及致病性测定[J]. 刘丹,贺红,黄海波,谢建辉,柴婷婷.  中草药. 2011(08)
[3]青枯雷尔氏菌Tn5转座子无致病力突变株构建及其生物学特性[J]. 程本亮,车建美,刘波.  农业生物技术学报. 2011(01)
[4]Tn5转座突变技术在革兰氏阴性细菌分子遗传研究中的应用[J]. 年洪娟,陈丽梅,李昆志.  中国生物工程杂志. 2009(12)
[5]利用拮抗微生物防治中药材土传病害研究进展[J]. 赵阿娜,丁万隆.  中国中药杂志. 2005(07)



本文编号：3116751