番茄lncRNA39026在抗病中的作用研究

发布时间：2021-04-14 19:39

　　番茄（Solanum lycopersicum）是一种营养丰富、种植广泛的茄科植物,深受人们的喜爱。由致病疫霉（Phytophthora infestans）侵染引起的晚疫病常导致番茄的大面积减产,造成巨大的经济损失,通常的化学防治会带来环境污染等问题。因此,亟需探寻有效的防治手段。利用生物技术挖掘番茄抗晚疫病的关键因子,明确它们作用的分子机制并进行抗病品种培育尤为重要。近年来,随着测序技术的发展,人们发现长非编码RNA（long non-coding RNAs,lncRNAs）可以作为调控因子参与许多生物过程,包括植物抗病等。因此,本研究从实验室前期构建的番茄与致病疫霉互作转录组中筛选出一条明显差异表达的lncRNA——lncRNA39026,推测其可能在番茄抗晚疫病中的作用非凡,进而开展了一系列研究工作,明确了它的功能。首先,为了探究lncRNA39026的作用方式,在获得lncRNA39026序列后分析其内源靶标模拟（endogenous target mimicry,eTM）位点,发现lncRNA39026上存在miR168a的eTM位点,推测lncRNA39026能够通过吸附... 

【文章来源】：大连理工大学辽宁省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
1 文献综述
    1.1 番茄与晚疫病
    1.2 lncRNAs与miRNAs在植物抗病中的研究进展
        1.2.1 lncRNAs及其参与的植物抗病过程概述
        1.2.2 miRNAs及其参与的抗病过程概述
        1.2.3 lncRNAs与miRNAs的相互作用
        1.2.4 植物中lncRNAs的功能研究策略
        1.2.5 响应番茄晚疫病的主要lncRNAs与miRNAs
    1.3 研究的目的与意义
    1.4 本研究的主要内容
2 lncRNA39026的克隆及过表达和沉默载体的构建
    2.1 材料、试剂和仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 番茄和晚疫病菌的培养及接种
        2.2.2 总RNA的提取和反转录
        2.2.3 lncRNA39026的克隆及eTM位点分析
        2.2.4 lncRNA39026的表达特性分析
        2.2.5 pBI121-lncRNA39026过表达载体的构建
        2.2.6 VIGS-lncRNA39026沉默载体的构建
        2.2.7 数据处理
    2.3 结果与分析
        2.3.1 RNA样品的质量分析
        2.3.2 克隆的lncRNA39026及验证
        2.3.3 lncRNA39026序列上的eTM位点分析
        2.3.4 病菌侵染后lncRNA39026、miR168a、SlAGO1的表达特性
        2.3.5 pBI121-lncRNA39026过表达载体的获得
        2.3.6 VIGS-lncRNA39026沉默载体的获得
    2.4 讨论
    2.5 小结
3 过表达和沉默lncRNA39026对番茄抗病性的影响
    3.1 材料、试剂和仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 农杆菌工程菌的制备
        3.2.2 lncRNA39026的瞬时过表达
        3.2.3 lncRNA39026的沉默
        3.2.4 植株的抗病性分析
        3.2.5 番茄叶片组织化学染色
        3.2.6 lncRNA39026的稳定过表达
        3.2.7 数据处理
    3.3 结果与分析
        3.3.1 农杆菌工程菌的获得
        3.3.2 瞬时过表达lncRNA39026后番茄的抗病表现
        3.3.3 沉默lncRNA39026后番茄的抗病表现
        3.3.4 稳定过表达lncRNA39026番茄材料及其特性
    3.4 讨论
    3.5 小结
4 异源过表达lncRNA39026对烟草抗病性的影响
    4.1 材料、试剂和仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 烟草的种植、枯萎病菌的培养及孢子悬浮液的制备
        4.2.2 lncRNA39026在烟草中的瞬时过表达
        4.2.3 烟草的遗传转化及阳性植株的筛选
        4.2.4 过表达lncRNA39026烟草的分子鉴定
        4.2.5 过表达lncRNA39026烟草的抗病性检测
        4.2.6 烟草中相关抗病基因的检测
        4.2.7 组织化学染色
        4.2.8 数据处理
    4.3 结果与分析
        4.3.1 瞬时过表达lncRNA39026后烟草的抗病表现
        4.3.2 过表达lncRNA39026烟草的获得
        4.3.3 稳定过表达lncRNA39026后烟草的抗病表现
    4.4 讨论
    4.5 小结
结论
参考文献
附录A 六种培养基的配制
附录B lncRNA39026及miR168a成熟体的序列
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Plant lncRNAs are enriched in and move systemically through the phloem in response to phosphate deficiency[J]. Zhaoliang Zhang,Yi Zheng,Byung-Kook Ham,Shupei Zhang,Zhangjun Fei,William J.Lucas.  Journal of Integrative Plant Biology. 2019(04)
[2]Non-coding RNAs and Their Roles in Stress Response in Plants[J]. Jingjing Wang,Xianwen Meng,Oxana B.Dobrovolskaya,Yuriy L.Orlov,Ming Chen.  Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2017(05)
[3]A long noncoding RNA involved in rice reproductive development by negatively regulating osa-miR160[J]. Meng Wang,Hua-Jun Wu,Jun Fang,Chengcai Chu,Xiu-Jie Wang.  Science Bulletin. 2017(07)
[4]Long Non-coding RNAs and Their Biological Roles in Plants[J]. Xue Liu,Lili Hao,Dayong Li,Lihuang Zhu,Songnian Hu.  Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2015(03)

硕士论文
[1]番茄TPR基因对逆境胁迫响应及SlTPR4互作蛋白研究[D]. 郑洋洋.东北农业大学 2019
[2]miR482b/c在番茄抗晚疫病中的功能研究[D]. 贺晓丽.大连理工大学 2018
[3]miR1918在番茄与致病疫霉互作中的特性及功能分析[D]. 王炜晨.大连理工大学 2015
[4]番茄抗晚疫病（Phytophythora infestans）Ph-2和Ph-3基因的抗性机制研究[D]. 李涛.中国农业科学院 2014
[5]番茄VIGS体系构建及在番茄白粉病抗性研究上的应用[D]. 马红珍.河南大学 2010



本文编号：3137898