桑树OSM及PLA1-ⅡDelta基因克隆及其在干旱胁迫下的功能研究
发布时间：2021-04-15 18:43
桑树是我国重要的经济林木,因其含有较强的抗逆性而成为植物生态科学研究的重要材料。桑树抗逆基因的筛选与研究可为桑树抗性育种提供基因资源。在已鉴定的植物抗性基因中,渗调蛋白（osmotins,OSMs）在植物遭受逆境胁迫时具有重要的调节作用,但桑树OSM的功能研究尚未见报道。磷脂酶（Phospholipases）作为生物体内负责生物合成和磷脂代谢的一类酶,其与植物的抗逆性也有密切联系。Ma PLA1-Ⅱδ基因是磷脂酶家族中重要的一类,其发现和研究起步较晚,桑树Ma PLA1-Ⅱδ的研究尚未见报道。因此,桑树渗调蛋白与植物磷脂酶的进一步研究对促进桑树抗逆分子机制研究具有重要意义。本研究以生长45 d的丰驰桑（Morus alba.）幼苗为材料,克隆了桑树Ma PLA1-Ⅱδ的4个成员以及桑树渗调蛋白基因MaOSM,进行了基因的组织表达模式分析、干旱应答胁迫分析,并将以上基因转化拟南芥,获得过表达拟南芥植株,并以野生型拟南芥为对照,从表型、生理生化、基因表达等多个层面上进行了抗旱性分析,得到以下结果:（1）MaOSM及Ma PLA1-Ⅱδ基因家族中的各成员在桑树叶,芽,根,花中均有表达,且均在...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
磷脂酶作用位点示意图(GuanqunCetal.2013)
苎?字??Hirofumietal.2002)，在自然界分布广泛，已在众多的动植物组织细胞及微生物中发现具有PLA1的活性。目前已经纯化和克隆了的磷脂酶A1的种类较少，是磷脂酶家族中功能研究最少的一类，其中包括大鼠血小板的磷脂酰丝氨酸（PS）特异性PLA1（PS-PLA1），囊泡毒液的PLA1，以及磷脂酸（PA）优先型PLA1（PA-PLA1）(Hirofumietal.2002)。植物中PLA1的研究发现更晚，目前已知的相关基因研究较少，基因组数据已经鉴定出在拟南芥的PLA1家族中有12种亚型，这些蛋白质可以根据其结构与序列的相似性分为3大类（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），（如图1-2）。图1-2拟南芥PLA1家族的系统发育树(RyuSB2004)Figure1-2.PhylogenetictreeoftheArabidopsisPLA1family(Ryu2004)
第二章MaOSM的克隆及功能研究13离心60s后丢弃废液，再空离心2min后。换取新离心管，加入50μL的无菌水于膜中央，静置1min后12000×g离心1min后得到质粒。2.1.1.9双酶切验证提取的pMD18-T载体质粒与表达载体PCAMBIA1301-eGFP（如图2-1）分别用酶KpnⅠ与XbaⅠ进行双酶切，反应体系如下：试剂用量质粒/空载质粒15μL1×Buffer4μLBSA2μLXbaⅠ1μLKpnⅠ1μL无菌水27μLTotal50μL37℃反应4h后进行琼脂糖凝胶电泳，对酶切后的线性载体进行胶回收。图2-1.表达载体PCAMBIA1301-eGFP图示Figure2-1ExpressionvectorPCAMBIA1301-eGFPdiagram2.1.1.10过表达载体的构建将空载与目的基因的回收产物用T4DNA连接酶连接，反应体系如下：试剂用量空载回收产物0.5μL目的基因回收产物3.5μLT4DNALigase0.5μL10×Buffer0.5μLTotal5μL体系配置完成后放入4℃反应12h，产物直接用于下一步转化。参照3.1.6的步骤将构建的载体转入大肠杆菌并送生工生物工程股份有限公司测序，参照3.1.7扩摇阳
【参考文献】：
期刊论文
[1]桑树渗调蛋白基因的克隆及表达和功能分析[J]. 尚姝婷,李帅军,苏超,焦锋,董小龙,张敏娟,钱永华. 蚕业科学. 2019(05)
[2]干旱胁迫下植物体内活性氧的作用机制[J]. 王福祥,肖开转,姜身飞,曲梦宇,连玲,何炜,陈丽萍,谢华安,张建福. 科学通报. 2019(17)
[3]不同旱地小麦品种花后叶片叶绿素含量及光合特性研究[J]. 张东旭,张俊灵,闫金龙,冯丽云,杨毅,胡丹珠. 农业科技通讯. 2019(05)
[4]NaCl和Na2SO4胁迫对裸果木种子萌发的影响[J]. 杨琦琦,蒋志荣,黄海霞,魏振艳,王亮,连转红. 干旱区资源与环境. 2019(03)
[5]PEG预处理对水分胁迫下水稻根系抗氧化酶同工酶及其表达的影响[J]. 李雪妹,刘畅,单羽,李雪梅. 江苏农业科学. 2018(07)
[6]紫穗槐幼苗根系生理特性和解剖结构对PEG-6000模拟干旱的响应[J]. 王竞红,张秀梅,陈艾,周蕴薇,陈鹏,江远芳. 生态学报. 2018(02)
[7]丝绸之路经济带建设中桑树产业发展的思考[J]. 苏超,钱永华. 蚕业科学. 2017(02)
[8]作物种子萌发生理与遗传研究进展[J]. 郑安俭,王州飞,张红生. 江苏农业学报. 2017(01)
[9]植物激素ABA调控侧根生长发育的研究进展[J]. 董寰,白玲,宋纯鹏. 中国农学通报. 2016(18)
[10]干旱胁迫对大麦幼苗根系的影响[J]. 惠宏杉,林立昊,齐军仓,廖乐,王超龙,程海涛. 麦类作物学报. 2015(09)
本文编号：3139887
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
磷脂酶作用位点示意图(GuanqunCetal.2013)
苎?字??Hirofumietal.2002)，在自然界分布广泛，已在众多的动植物组织细胞及微生物中发现具有PLA1的活性。目前已经纯化和克隆了的磷脂酶A1的种类较少，是磷脂酶家族中功能研究最少的一类，其中包括大鼠血小板的磷脂酰丝氨酸（PS）特异性PLA1（PS-PLA1），囊泡毒液的PLA1，以及磷脂酸（PA）优先型PLA1（PA-PLA1）(Hirofumietal.2002)。植物中PLA1的研究发现更晚，目前已知的相关基因研究较少，基因组数据已经鉴定出在拟南芥的PLA1家族中有12种亚型，这些蛋白质可以根据其结构与序列的相似性分为3大类（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），（如图1-2）。图1-2拟南芥PLA1家族的系统发育树(RyuSB2004)Figure1-2.PhylogenetictreeoftheArabidopsisPLA1family(Ryu2004)
第二章MaOSM的克隆及功能研究13离心60s后丢弃废液，再空离心2min后。换取新离心管，加入50μL的无菌水于膜中央，静置1min后12000×g离心1min后得到质粒。2.1.1.9双酶切验证提取的pMD18-T载体质粒与表达载体PCAMBIA1301-eGFP（如图2-1）分别用酶KpnⅠ与XbaⅠ进行双酶切，反应体系如下：试剂用量质粒/空载质粒15μL1×Buffer4μLBSA2μLXbaⅠ1μLKpnⅠ1μL无菌水27μLTotal50μL37℃反应4h后进行琼脂糖凝胶电泳，对酶切后的线性载体进行胶回收。图2-1.表达载体PCAMBIA1301-eGFP图示Figure2-1ExpressionvectorPCAMBIA1301-eGFPdiagram2.1.1.10过表达载体的构建将空载与目的基因的回收产物用T4DNA连接酶连接，反应体系如下：试剂用量空载回收产物0.5μL目的基因回收产物3.5μLT4DNALigase0.5μL10×Buffer0.5μLTotal5μL体系配置完成后放入4℃反应12h，产物直接用于下一步转化。参照3.1.6的步骤将构建的载体转入大肠杆菌并送生工生物工程股份有限公司测序，参照3.1.7扩摇阳
【参考文献】：
期刊论文
[1]桑树渗调蛋白基因的克隆及表达和功能分析[J]. 尚姝婷,李帅军,苏超,焦锋,董小龙,张敏娟,钱永华. 蚕业科学. 2019(05)
[2]干旱胁迫下植物体内活性氧的作用机制[J]. 王福祥,肖开转,姜身飞,曲梦宇,连玲,何炜,陈丽萍,谢华安,张建福. 科学通报. 2019(17)
[3]不同旱地小麦品种花后叶片叶绿素含量及光合特性研究[J]. 张东旭,张俊灵,闫金龙,冯丽云,杨毅,胡丹珠. 农业科技通讯. 2019(05)
[4]NaCl和Na2SO4胁迫对裸果木种子萌发的影响[J]. 杨琦琦,蒋志荣,黄海霞,魏振艳,王亮,连转红. 干旱区资源与环境. 2019(03)
[5]PEG预处理对水分胁迫下水稻根系抗氧化酶同工酶及其表达的影响[J]. 李雪妹,刘畅,单羽,李雪梅. 江苏农业科学. 2018(07)
[6]紫穗槐幼苗根系生理特性和解剖结构对PEG-6000模拟干旱的响应[J]. 王竞红,张秀梅,陈艾,周蕴薇,陈鹏,江远芳. 生态学报. 2018(02)
[7]丝绸之路经济带建设中桑树产业发展的思考[J]. 苏超,钱永华. 蚕业科学. 2017(02)
[8]作物种子萌发生理与遗传研究进展[J]. 郑安俭,王州飞,张红生. 江苏农业学报. 2017(01)
[9]植物激素ABA调控侧根生长发育的研究进展[J]. 董寰,白玲,宋纯鹏. 中国农学通报. 2016(18)
[10]干旱胁迫对大麦幼苗根系的影响[J]. 惠宏杉,林立昊,齐军仓,廖乐,王超龙,程海涛. 麦类作物学报. 2015(09)
本文编号：3139887
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