大丽轮枝菌致病相关基因VdNOP12及VdLHS1的功能分析
发布时间：2021-04-16 10:43
大丽轮枝菌（Verticillium dahliae Kleb.）属于半知菌类轮枝孢属真菌,寄主范围极广,可引起200多种双子叶植物的黄萎病;其中由其引起的棉花黄萎病被称为棉花的“癌症”,是制约我国棉花生产的主要因素之一。虽然目前棉花黄萎病的侵染循环比较清楚,但是由于大丽轮枝菌的微菌核在土壤中存活时间长、抗病育种滞后和缺乏环境友好且防治效果好的杀菌剂等因素导致该病害目前尚无有效的防治手段。研究大丽轮枝菌的致病机理是设计有效防治策略的基础性工作。本研究以落叶型大丽轮枝菌Vd991的T-DNA插入突变体库为材料,对其中294个T-DNA插入突变体在寄主棉花上进行致病力筛选,共获得9个与野生型Vd991菌株相比致病力显著降低的突变体。Southern杂交结果表明9个突变体中只有1个突变体的T-DNA为双拷贝插入,其余8个突变体均为单拷贝插入,单拷贝插入率为88.9%。生物学特性分析发现T-DNA的插入导致这些突变体在生长速率和产孢量等方面与野生型Vd991相比均有不同程度的变化。借助hiTAIL-PCR（high-efficiency thermal asymmetric interlace...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：97 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
大丽轮枝菌致病缺陷型T-DNA突变体的筛选Fig.2.1Evaluatingthepathogenicityofmutant
A：PCR检测Hyg；B:Southern 杂交检测T-DNA插入拷贝数。A: PCR analysis of the Hyg. B: Southern blot analysis of copy number of T-DNA.图2.2 突变体中潮霉素基因以及T-DNA插入拷贝数的检测Fig.2.2 Analysis of hygromycin gene and T-DNA copy number in the Vd991 andpathogeniciy-defective T-DNA mutants2.3.3 致病缺陷型突变体的生物学表型分析在营养比较丰富的 CM 培养基上，突变体菌株和野生型 Vd991 相比，在菌落生长速率和产孢量上发生了不同程度的变化，但是未发现有产生微菌核的突变体(图 2.3A)。将直径约为 5 mm 的菌饼接种到 CM 培养基的中央，10 天后分别测量野生型和突变体菌落直径后计算生长速率，结果表明，与野生型 Vd991 每天 3.49±0.42 mm 的生长速率相比，突变体 M12A11、M12B05、M12H01、M13E01 和 M13H10 的生长速率下降极显著(p＜0.01)；其中突变体 M13E01 与野生型相比生长速率最慢
突变体 M12B05，M12B10 和 M13H08 产孢量与野生型相比虽略有下降但差异不显著(图2.3C)。上述结果表明 T-DNA 的插入在不同程度上影响了突变体的生长速率和产孢能力。
【参考文献】：
期刊论文
[1]大丽轮枝菌致病性相关突变体快速筛选体系的建立[J]. 王新艳,张丹丹,桂月晶,李楠洋,徐明,陈捷胤,戴小枫. 中国农业科学. 2015(14)
[2]膜泡运输蛋白VdSec22参与大丽轮枝菌胞外蛋白的分泌和致病性[J]. 田李,徐荣旗,王转斌,刘娜,冯凤鹃,曲志才. 微生物学报. 2015(07)
[3]绿色荧光蛋白基因标记棉花黄萎病菌[J]. 徐明,桂月晶,祁伟彦,柳少燕,陈捷胤,戴小枫. 植物保护. 2013(05)
[4]冷休克蛋白与肿瘤的研究进展[J]. 张海涛,薛菁晖,张志文. 中华临床医师杂志(电子版). 2013(05)
[5]棉花黄萎病菌致病相关基因VdMFS1敲除载体的构建[J]. 李彩红,李志芳,冯自力,赵丽红,师勇强,王永波,朱荷琴. 中国棉花. 2013(01)
[6]大肠杆菌蛋白质分泌机理及其重组蛋白分泌表达新进展[J]. 何冰芳,米兰,陈文华. 食品与生物技术学报. 2012(06)
[7]高效大丽轮枝菌（Verticillium dahliae）基因敲除体系的构建[J]. 田李,陈捷胤,汪佳妮,王金龙,戴小枫. 微生物学报. 2011(07)
[8]动物热应激反应机制研究进展[J]. 李琳,徐辰义,杨淑华,龙淼,何剑斌. 动物医学进展. 2011(04)
[9]棉花枯、黄萎病的诊断与防治[J]. 杨秀荣,刘水芳,孙淑琴. 天津农业科学. 2010(02)
[10]征服植物癌症——枯萎病和黄萎病的研究[J]. 崔明华. 科技创新导报. 2010(12)
博士论文
[1]抑制Hsp90诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制研究[D]. 王琪琳.山东大学 2013
硕士论文
[1]酵母蛋白功能研究[D]. 陈佩佩.大连工业大学 2014
本文编号：3141277
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：97 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
大丽轮枝菌致病缺陷型T-DNA突变体的筛选Fig.2.1Evaluatingthepathogenicityofmutant
A：PCR检测Hyg；B:Southern 杂交检测T-DNA插入拷贝数。A: PCR analysis of the Hyg. B: Southern blot analysis of copy number of T-DNA.图2.2 突变体中潮霉素基因以及T-DNA插入拷贝数的检测Fig.2.2 Analysis of hygromycin gene and T-DNA copy number in the Vd991 andpathogeniciy-defective T-DNA mutants2.3.3 致病缺陷型突变体的生物学表型分析在营养比较丰富的 CM 培养基上，突变体菌株和野生型 Vd991 相比，在菌落生长速率和产孢量上发生了不同程度的变化，但是未发现有产生微菌核的突变体(图 2.3A)。将直径约为 5 mm 的菌饼接种到 CM 培养基的中央，10 天后分别测量野生型和突变体菌落直径后计算生长速率，结果表明，与野生型 Vd991 每天 3.49±0.42 mm 的生长速率相比，突变体 M12A11、M12B05、M12H01、M13E01 和 M13H10 的生长速率下降极显著(p＜0.01)；其中突变体 M13E01 与野生型相比生长速率最慢
突变体 M12B05，M12B10 和 M13H08 产孢量与野生型相比虽略有下降但差异不显著(图2.3C)。上述结果表明 T-DNA 的插入在不同程度上影响了突变体的生长速率和产孢能力。
【参考文献】：
期刊论文
[1]大丽轮枝菌致病性相关突变体快速筛选体系的建立[J]. 王新艳,张丹丹,桂月晶,李楠洋,徐明,陈捷胤,戴小枫. 中国农业科学. 2015(14)
[2]膜泡运输蛋白VdSec22参与大丽轮枝菌胞外蛋白的分泌和致病性[J]. 田李,徐荣旗,王转斌,刘娜,冯凤鹃,曲志才. 微生物学报. 2015(07)
[3]绿色荧光蛋白基因标记棉花黄萎病菌[J]. 徐明,桂月晶,祁伟彦,柳少燕,陈捷胤,戴小枫. 植物保护. 2013(05)
[4]冷休克蛋白与肿瘤的研究进展[J]. 张海涛,薛菁晖,张志文. 中华临床医师杂志(电子版). 2013(05)
[5]棉花黄萎病菌致病相关基因VdMFS1敲除载体的构建[J]. 李彩红,李志芳,冯自力,赵丽红,师勇强,王永波,朱荷琴. 中国棉花. 2013(01)
[6]大肠杆菌蛋白质分泌机理及其重组蛋白分泌表达新进展[J]. 何冰芳,米兰,陈文华. 食品与生物技术学报. 2012(06)
[7]高效大丽轮枝菌（Verticillium dahliae）基因敲除体系的构建[J]. 田李,陈捷胤,汪佳妮,王金龙,戴小枫. 微生物学报. 2011(07)
[8]动物热应激反应机制研究进展[J]. 李琳,徐辰义,杨淑华,龙淼,何剑斌. 动物医学进展. 2011(04)
[9]棉花枯、黄萎病的诊断与防治[J]. 杨秀荣,刘水芳,孙淑琴. 天津农业科学. 2010(02)
[10]征服植物癌症——枯萎病和黄萎病的研究[J]. 崔明华. 科技创新导报. 2010(12)
博士论文
[1]抑制Hsp90诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制研究[D]. 王琪琳.山东大学 2013
硕士论文
[1]酵母蛋白功能研究[D]. 陈佩佩.大连工业大学 2014
本文编号：3141277
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