白粉菌诱导簇毛麦叶片酵母双杂交文库构建及CMPG1-Ⅴ候选互作蛋白筛选

发布时间：2021-04-20 06:22

　　[目的]本文旨在使用Mate&Plate^TM技术构建簇毛麦受白粉菌诱导的酵母双杂交文库,鉴定正向调节小麦白粉病抗性的簇毛麦E3泛素连接酶蛋白CMPG1-Ⅴ的互作蛋白,为解析其抗病性机制奠定基础。[方法]提取白粉菌诱导前及诱导后1、2、4、6、12、24和48 h的簇毛麦叶片总RNA,利用SMART技术分离纯化mRNA,合成ds cDNA,将ds cDNA和pGADT7-Rec载体共同转入酵母菌株Y187,构建簇毛麦酵母双杂交文库,明确文库插入片段大小和滴度。以CMPG1-Ⅴ为诱饵筛选文库,并对部分互作蛋白进行了回补验证,利用BiFC方法验证CMPG1-Ⅴ与筛选到的1个互作蛋白CMIN6（MYB25-V）的体内互作。[结果]成功构建了受白粉菌诱导的簇毛麦叶片酵母双杂交文库,文库滴度为9.5×10⁷ CFU·mL^-1,插入片段长度为250～2 000 bp,重组率为100%。以CMPG1-Ⅴ为诱饵筛选文库,获得79个互作蛋白,挑选其中10个互作蛋白进行回补验证。通过BiFC试验验证了CMPG1-Ⅴ与MYB25-V的体... 

【文章来源】：南京农业大学学报. 2020,43(04)北大核心CSCD

【文章页数】：11 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 植物材料及处理方法
    1.2 菌株和载体
    1.3 主要试剂
    1.4 总RNA提取和mRNA分离
    1.5 酵母双杂交cDNA文库的构建
    1.6 库容量及重组率和插入片段长度的鉴定
    1.7 诱饵载体的构建及自激活检测
    1.8 CMPG1-V互作蛋白的筛选及回补验证
    1.9 双分子荧光互补（BiFC）试验
    1.10 基因表达分析
2 结果与分析
    2.1 簇毛麦总RNA提取、mRNA纯化和ds cDNA的合成
    2.2 簇毛麦酵母双杂交文库的构建及评价
    2.3 以CMPG1-V为诱饵筛选簇毛麦cDNA文库
    2.4 部分互作蛋白的回补验证
    2.5 CMPG1-V与CMIN6体内互作分析
    2.6 MYB25-V受白粉菌诱导表达分析
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
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[2]海岛棉纤维均一化酵母双杂交文库的构建与GbTCP5互作蛋白的筛选[J]. 郑凯,曲延英,倪志勇,蔡永生,石颖颖,陈全家.  核农学报. 2019(10)
[3]农药污染及环境保护措施研究[J]. 董美林.  山西农经. 2018(21)
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[5]辣椒疫霉菌诱导辣椒酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定[J]. 王玉姣,陈姗姗,孙柏华,艾聪聪,王中洋,张修国.  山东农业大学学报(自然科学版). 2018(03)
[6]玉米酵母双杂交cDNA文库的构建及ZmCEN互作蛋白的筛选[J]. 雷海英,白凤麟,段永红,王志军.  西北植物学报. 2018(04)
[7]小麦白粉病及其抗性研究进展[J]. 杨美娟,黄坤艳,韩庆典.  分子植物育种. 2016(05)
[8]植物U-box蛋白在植物先天免疫反应中的作用及其研究进展[J]. 戴树元,李魏,任佐华,刘二明.  中国农学通报. 2016(14)
[9]酵母双杂交技术应用进展[J]. 王婷,葛怀娜,郭宏.  生物技术进展. 2015(05)
[10]白粉菌侵染后的拟南芥酵母双杂交cDNA文库构建及其利用[J]. 黄衍焱,杨玲珑,王莹,李冉,鲁黎明,王文明.  植物病理学报. 2015(04)



本文编号：3149152