氧化胁迫条件下抗坏血酸诱导提高Pichia caribbica生防效力及其机制研究

发布时间：2021-04-30 08:17

　　水果采后腐烂对全球经济都造成了巨大损失。造成水果采后腐烂的主要原因是由于病原菌侵染所引起的采后病害。苹果采后主要病害之一的青霉病是由扩展青霉（Penicillium expansum）引起的。利用拮抗酵母控制苹果采后青霉病具有广阔的应用前景和发展潜力。但是,拮抗酵母在实际应用过程中往往会受到氧化胁迫的影响而导致其生防效力下降。因此,如何提高拮抗酵母的氧化胁迫耐受性是提高其生防效力的关键问题之一。抗坏血酸（维生素C）是一种很好的还原剂,可以清除活性氧（ROS）,从而使得细胞在遭受氧化胁迫时受到保护。本研究通过在培养基中添加抗坏血酸诱导培养卡利比克毕赤酵母（Pichia caribbica）,提高其对H₂O₂造成的氧化胁迫的耐受性,从而提高其对苹果青霉病的防治效力;通过添加抗坏血酸诱导培养对氧化胁迫条件下的P.caribbica在苹果表面的生长动态、胞内ROS的积累量以及抗氧化相关酶活的影响,阐明在氧化胁迫条件下,抗坏血酸诱导提高该拮抗酵母生防效力的生理机制,并借助于蛋白质组和转录组技术初步揭示其分子机制,为拮抗酵母提高生防效力提供新思路,使拮抗... 

【文章来源】：江苏大学江苏省

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 水果采后病害及其研究现状
    1.2 控制水果采后病害的主要方法
        1.2.1 物理法
        1.2.2 化学法
        1.2.3 生物防治法
        1.2.4 结合法
    1.3 氧化胁迫对拮抗酵母防治效力的影响
    1.4 提高拮抗酵母氧化胁迫耐受性的方法
    1.5 论文研究的目的、意义和研究内容
第二章 氧化胁迫条件下抗坏血酸诱导培养对P.caribbica生防效力的影响
    2.1 引言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 主要仪器与设备
        2.2.2 化学试剂
        2.2.3 水果
        2.2.4 培养基
        2.2.5 酵母菌
        2.2.6 抗坏血酸诱导及H_2O_2 处理P.caribbica
        2.2.7 病原菌
        2.2.8 P.carribbica对 P.expansum的体外抑制作用
        2.2.9 P.caribbica对苹果青霉病的控制作用
        2.2.10 数据处理与分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 H_2O_2 诱导的氧化胁迫对P.caribbica控制苹果青霉病效力的影响
        2.3.2 不同浓度抗坏血酸诱导培养对P.caribbica控制苹果青霉病效力的影响
        2.3.3 氧化胁迫条件下抗坏血酸诱导培养对P.caribbica抑制P.expansum生长的影响
        2.3.4 在氧化胁迫条件下抗坏血酸诱导培养对P.caribbica控制苹果青霉病效力的影响
    2.4 本章小结与讨论
第三章 氧化胁迫条件下抗坏血酸诱导提高P.caribbica生防效力的生理机制
    3.1 引言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 主要仪器与设备
        3.2.2 主要试剂
        3.2.3 供试水果
        3.2.4 培养基
        3.2.5 酵母菌及其处理
        3.2.6 病原菌
        3.2.7 P.caribbica在苹果表面的生长动态
        3.2.8 P.caribbica细胞内ROS积累的测定
        3.2.9 P.caribbica抗氧化相关酶活及(MDA)含量的测定
    3.3 结果与分析
        3.3.1 氧化胁迫条件下抗坏血酸诱导培养对P.caribbica在苹果表面生长动态的影响
        3.3.2 氧化胁迫条件下抗坏血酸诱导培养对P.caribbica细胞内ROS积累的影响
        3.3.3 氧化胁迫条件下抗坏血酸诱导培养对P.caribbica抗氧化相关酶活和MDA含量的影响
    3.4 本章小结与讨论
第四章 基于蛋白组学分析抗坏血酸诱导提高P.caribbica氧化胁迫耐受性的机制
    4.1 引言
    4.2 材料与方法
        4.2.1 实验仪器与设备
        4.2.2 酵母
        4.2.3 总蛋白的提取
        4.2.4 双向电泳
    4.3 结果与分析
        4.3.1 氧化胁迫下经过抗坏血酸诱导后P.caribbica的蛋白应答双向电泳图
        4.3.2 氧化胁迫下P.caribbica单独使用以及经过抗坏血酸诱导后蛋白质谱鉴定结果
        4.3.3 差异蛋白的GO分类
    4.4 本章小结与讨论
第五章 基于转录组分析抗坏血酸诱导提高P.caribbica氧化胁迫耐受性的机制
    5.1 引言
    5.2 材料与方法
        5.2.1 主要仪器与设备
        5.2.2 酵母菌
        5.2.3 上机测序以及文库构建
        5.2.4 RNA样品检测
        5.2.5 RNA文库质控
        5.2.6 RT-qPCR的验证
    5.3 结果与分析
        5.3.1 转录组测序结果
        5.3.2 氧化胁迫条件下酵母差异表达基因GO分析
        5.3.3 DEGs的 KEGG分类
        5.3.4 差异基因COG富集分析
        5.3.5 差异基因KOG富集分析
    5.4 RT-qPCR目的基因的验证
        5.4.1 引物设计及验证
        5.4.2 RT-qPCR结果分析
    5.5 本章小结与讨论
第六章 结论与展望
    6.1 主要结论
    6.2 展望
参考文献
致谢
攻读硕士期间学术成果


【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
[1]牛蒡低聚果糖诱导烟草系统抗性的表达谱分析及信号转导机制的研究[D]. 郭默然.山东大学 2014

硕士论文
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[2]贮藏温度与包装方式对蓝莓采后贮藏品质和生理的影响[D]. 王翠红.南京农业大学 2012



本文编号：3169162