斜纹夜蛾CSP基因的克隆及功能研究

发布时间：2021-05-08 02:32

　　斜纹夜蛾（Spodoptera litura）是全球性分布的农业害虫,具繁殖快、食性杂等特点,斜纹夜蛾对农药抗性的日益增强,常用农药将逐渐降低对斜纹夜蛾的治理效率,探究其中的原因并采取措施已经迫在眉睫。斜纹夜蛾具有完善的嗅觉感受系统,而化学感受蛋白（Chemosensory Protein）作为其中不可缺少的组成部分,扮演着重要的角色。研究表明,农药与害虫嗅觉系统有着密不可分的关系。因此,有必要对斜纹夜蛾化学感受蛋白的功能及农药与斜纹夜蛾化学感受蛋白之间的相互关系进行研究。本研究克隆了16个斜纹夜蛾化学感受蛋白（SlituCSP）基因,对16个SlituCSP进行了系统发育、WebLogo、三维结构、信号肽等生物信息学分析。通过荧光定量PCR分析了16个SlituCSP在雌雄触角中的表达水平差异及在雄蛾中的组织表达特性,结果显示,15个SlituCSP在雄性触角中的表达水平高于雌性触角,SlituCSP在雄性各个组织中均有表达,部分SlituCSP在特定组织中表达水平较高,和表达量低的组织相比,其差异甚至达到千倍以上。用毒死蜱、甲维盐和氟虫腈等三种治理斜纹夜蛾的常用农药对斜纹夜蛾雄蛾进... 

【文章来源】：中国计量大学浙江省

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
致谢
摘要
abstract
1 绪论
    1.1 斜纹夜蛾
    1.2 化学感受蛋白
        1.2.1 昆虫嗅觉系统
        1.2.2 昆虫化学感受蛋白
        1.2.3 昆虫化学感受蛋白的生化特性
        1.2.4 昆虫化学感受蛋白分子结构
        1.2.5 昆虫化学感受蛋白的生理功能
    1.3 农药概况
    1.4 农药与昆虫CSPs的关系
    1.5 本课题的研究内容及其意义
    1.6 课题来源及论文内容安排
2 SlituCSP的系统发育分析、WebLogo和三维结构分析
    2.1 材料与方法
        2.1.0 序列获取
        2.1.1 系统发育树构建
        2.1.2 保守位点分析及信号肽预测
        2.1.3 三维结构预测
    2.2 结果
        2.2.1 系统发育分析
        2.2.2 保守位点分析及信号肽预测
        2.2.3 三维结构预测
    2.3 讨论
3 SlituCSP的性别表达差异和雄蛾的组织表达特性
    3.1 材料与方法
        3.1.1 试虫采集
        3.1.2 样品处理与收集
        3.1.3 RNA提取、第一链cDNA的合成
        3.1.4 基因的克隆和测序
        3.1.5 实时荧光定量PCR（qRT-PCR）
        3.1.6 数据分析
    3.2 结果
        3.2.1 SlituCSP在雌雄触角中的表达差异
        3.2.2 SlituCSP雄蛾组织表达特性
    3.3 讨论
4 SlituCSP的时空表达特性及农药等因子对表达的影响
    4.1 材料与方法
        4.1.1 样品采集
        4.1.2 样品处理
        4.1.3 RNA的提取及cDNA第一链合成
        4.1.4 qRT-PCR
        4.1.5 数据处理
    4.2 结果
        4.2.0 4个SlituCSP基因的时空表达
        4.2.1 逆境条件下对4个SlituCSP表达的影响
        4.2.2 毒死蜱、甲维盐、氟虫腈对斜纹夜蛾雄蛾CSP表达量的影响
        4.2.3 斜纹夜蛾雄蛾CSPs对毒死蜱、甲维盐、氟虫腈响应程度分析
        4.2.4 性信息素对4个SlituCSP表达的影响
    4.3 讨论
5 SlituCSP与农药的结合及下调SlituCSP18基因的表达对斜纹夜蛾存活率的影响
    5.1 实验材料与方法
        5.1.1 4 个SlituCSPs表达载体的构建
        5.1.2 重组SlituCSP的纯化
        5.1.3 Western Blot检测
        5.1.4 荧光竞争结合实验
        5.1.5 RNA双链的合成及注射
        5.1.6 数据统计与分析
    5.2 结果
        5.2.1 4 个SlituCSPs表达载体的构建
        5.2.2 4 个SlituCSPs的原核表达与纯化
        5.2.3 4 个SlituCSP蛋白与三种农药的结合
        5.2.4 农药对SlituCSP基因转录水平的影响与SlituCSP和农药结合强度的比较
        5.2.5 毒死蜱、甲维盐、氟虫腈对斜纹夜蛾雄蛾存活率的影响
        5.2.6 基因干扰SlituCSP18后，毒死蜱、甲维盐、氟虫腈对斜纹夜蛾雄蛾存活率的影响
    5.3 讨论
6 研究总结与展望
    6.1 研究总结
    6.2 论文创新点
    6.3 研究展望
参考文献
作者简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]低浓度毒死蜱对斜纹夜蛾幼虫生长发育和食物利用的影响[J]. 唐文成,孙虹霞,舒迎花,周强,张古忍.  环境昆虫学报. 2009(02)
[2]斜纹夜蛾的生物学特性[J]. 姚文辉.  华东昆虫学报. 2005(02)
[3]小菜蛾、甜菜夜蛾的抗药性现状及治理对策[J]. 司升云,吴仁锋,刘小明,邹丰.  长江蔬菜. 2001(01)
[4]斜纹夜蛾天敌作用的评价[J]. 蒋杰贤,梁广文,庞雄飞.  应用生态学报. 1999(04)
[5]斜纹夜蛾的抗药性及其防治[J]. 吴世昌,顾言真,王冬生.  上海农业学报. 1995(02)
[6]我国的大害虫——斜纹夜蛾[J]. 束炎南.  昆虫知识. 1959(03)



本文编号：3174497