健康和感染黄龙病砂糖桔细菌多样性分析

发布时间：2021-05-08 19:37

　　柑桔黄龙病（Citrus20Huanglongbing）是制约全球柑桔产业发展的毁灭性病害。柑桔黄龙病病原菌为变形菌门Proteobacteria变形菌纲α-亚纲韧皮部杆菌属Candidatus20Liberibacter20app.,属于革兰氏阴性细菌,专生于植物韧皮部组织。至今还未能获得纯化培养,柑桔黄龙病的致病机理以及有效防控一直以来难有显著的突破。植物内细菌多样性及动态规律会随宿主植物生理而改变,而一种病原菌的出现往往导致不同程度的菌群失衡或微生态失调。由于绝大多数植物细菌群落也存在无法分离培养难题,所以目前关于柑桔被黄龙病病原菌侵染后细菌多样性所知甚少。为了探索黄龙病病原菌侵染柑桔后的菌群多样性变化,开展以下相关研究工作:1)选取已发表的黄龙病特异性引物,并筛选出灵敏度最高的引物;2)利用筛选出特异性引物鉴定健康和感染黄龙病的砂糖桔样品;3)利用高通量测序和生物信息学比较分析健康和感病沙糖桔的菌群多样性。具体的研究内容与研究结果如下:1)柑桔黄龙病高灵敏度的引物筛选从已有文献报道的3对柑桔黄龙病PCR检测引物作为候选引物。在相同模板、扩增条件下,引物P1/P2的PCR结果显示... 

【文章来源】：仲恺农业工程学院广东省

【文章页数】：101 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 柑桔黄龙病
        1.1.1 柑橘黄龙病的研究背景
        1.1.2 柑桔黄龙病症状
        1.1.3 柑桔黄龙病病原
        1.1.4 柑桔黄龙病病原的寄主种类
    1.2 柑桔黄龙病检测方法
        1.2.1 柑桔黄龙病的传统检测方法
        1.2.2 柑桔黄龙病的分子生物学检测方法
    1.3 柑桔黄龙病防控技术
        1.3.1 抗病育种
        1.3.2 苗木脱毒
        1.3.3 化学防治技术
        1.3.4 物理防治技术
        1.3.5 生物防治技术
    1.4 目的意义、研究内容与技术路线
        1.4.1 目的意义
        1.4.2 研究内容
        1.4.3 技术路线
第二章 砂糖桔的柑桔黄龙病检测
    2.1 材料与方法
        2.1.1 供试材料与主要试剂仪器
        2.1.2 砂糖桔样品基因组总DNA提取
        2.1.3 不同引物检测黄龙病的灵敏性比较
    2.2 结果与分析
        2.2.1 砂糖桔基因组DNA抽提结果
        2.2.2 3对引物的灵敏度分析
        2.2.3 OI1/OI2c的分子检测分析
    2.3 总结与讨论
第三章 健康和感染黄龙病砂糖桔细菌多样性比较分析
    3.1 材料与方法
        3.1.1 供试材料与主要试剂仪器
        3.1.2 样品16SrDNA文库构建及质量检测
        3.1.3 上机测序
        3.1.4 下机数据处理
        3.1.5 微生物操作分类单元（operational taxonomic unit,OTU）划分及物种群落分析
        3.1.6 Alpha Diversity分析
        3.1.7 Beta Diversity分析
        3.1.8 样品组间性统计分析
    3.2 结果与分析
        3.2.1 16SrDNA文库构建及质量检测结果
        3.2.2 数据的预处理
        3.2.3 OTU及物种群落分析
        3.2.4 Alpha Diversity分析
        3.2.5 Beta Diversity分析
        3.2.6 样品组间统计分析
    3.3 总结与讨论
第四章 结论与展望
致谢
参考文献
附录A 属水平的组间物种显著性差异统计表
附录B OTUS差异统计表
攻读硕士学位期间取得的研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]浅谈柑橘黄龙病检疫防控对策[J]. 冯小龙,何世忠,唐仙寿,刘永华,吴佳徽.  中国植保导刊. 2016(03)
[2]柑橘黄龙病的传播介体-柑橘木虱在广东果园的发生调查[J]. 程保平,赵弘巍,彭埃天,宋晓兵,凌金锋,陈霞.  植物保护. 2016(01)
[3]基于调制荧光检测技术的柑橘黄龙病诊断[J]. 邓小玲,林亮生,兰玉彬.  华南农业大学学报. 2016(02)
[4]海南柑橘黄龙病PCR检测分析[J]. 杨毅,车海彦,曹学仁,陈旺,罗大全.  甘肃农业. 2015(24)
[5]柑橘黄龙病病原的研究进展及病株的简易鉴定[J]. 黄小耘,田甜.  东南园艺. 2015(06)
[6]柑橘黄龙病热处理防治技术研究进展[J]. 贾志成,郑加强,黄雅杰,周宏平,Ehsani Reza.  农业工程学报. 2015(23)
[7]种子传播黄龙病可能性研究[J]. 宋雅琴,娄兵海,白先进,邓崇岭,陈宜超,赵小龙,李贤良.  南方农业学报. 2015(05)
[8]柑橘黄龙病菌外膜蛋白的诱导表达[J]. 高玉霞,卢占军,钟八莲,易龙,苏华楠,赵培娅,刘志芳,赖爱萍,夏宜林.  赣南师范学院学报. 2014(06)
[9]柑橘花器和种子中黄龙病菌的定量分布及应用[J]. 娄兵海,宋雅琴,赵小龙,白先进,邓崇岭.  植物保护学报. 2014(04)
[10]柑橘黄龙病可视化LAMP检测技术的建立及应用[J]. 王贤达,林雄杰,胡菡青,王宗华,范国成.  热带作物学报. 2014(05)

博士论文
[1]中国柑橘黄龙病病原调查、种群遗传分化及其原噬菌体溶菌酶蛋白原核表达[D]. 苏华楠.西南大学 2013

硕士论文
[1]HLB感染柑桔韧皮部内生细菌区系的研究[D]. 王爱华.重庆大学 2010



本文编号：3175881