Hemocytin蛋白在家蚕应答家蚕微粒子虫感染中的免疫功能研究

发布时间：2021-05-13 16:18

　　家蚕作为蚕桑产业的重要昆虫,有很多病原都可以感染家蚕,而家蚕微粒子虫是其中最重要的病原之一。家蚕微粒子虫属于微孢子虫大类,也是被划分为真菌界的寄生性病原。微孢子虫的感染范围极广基本能够寄生所有动物,甚至人类。自1857年发现人类历史上第一种微孢子虫—家蚕微粒子虫（Nosema bombycis）以来,迄今为止已有1400多种微孢子虫被鉴定。家蚕通过很多免疫识别分子识别病原,其中有类免疫识别蛋白名为Hemocytin,它可能在家蚕抵御家蚕微粒子虫感染过程中起到关键作用。Hemocytin在家蚕血细胞（颗粒细胞）的颗粒中表达,其能识别病原并启动宿主免疫反应。在这项研究中,我们发现家蚕感染N.bombycis后,Hemocytin的转录和表达量明显上调,表明Hemocytin对N.bombycis的入侵有应答;我们再通过间接免疫荧光检测到Hemocytin能够识别入侵的N.bombycis,并找到了能够与Hemocytin互作的孢壁蛋白25;接着我们分析了Hemocytin识别N.bombycis后可以促进血细胞凝集和黑化,同时也证明了Hemocytin可以抑制N.bombycis的增殖。主... 

【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：85 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 昆虫的免疫防御概述
        1.1.1 昆虫细胞免疫
        1.1.2 昆虫体液免疫
        1.1.3 昆虫体内的免疫通路
        1.1.4 昆虫的模式识别分子/受体
    1.2 家蚕中Hemocytin及其同源物的研究进展
    1.3 微孢子虫概述
        1.3.1 微孢子虫的形态结构及生物学特征
        1.3.2 家蚕微粒子虫及家蚕微粒子病
第二章 引言
    2.1 研究背景
    2.2 研究目的及意义
    2.3 主要研究内容
        2.3.1 N.bombycis感染前后血淋巴中Hemocytin的转录和表达水平检测
        2.3.2 家蚕Hemocytin与 N.bombycis的相互作用分析
        2.3.3 Hemocytin在启动家蚕细胞免疫中的作用分析
    2.4 研究技术路线
第三章 N.bombycis感染前后血淋巴中Hemocytin的转录和表达水平检测
    3.1 材料与方法
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 主要试剂名称与配方
        3.1.3 实验仪器
        3.1.4 实验方法
    3.2 结果与分析
        3.2.1 N.bombycis感染前后血淋巴中Hemocytin的转录水平检测
        3.2.2 p ET-23b(+)-Hemocytin原核表达载体的构建
        3.2.3 p ET-23b(+)-Hemocytin重组蛋白的表达及纯化
        3.2.4 多克隆抗体的制备
        3.2.5 N.bombycis感染前后血淋巴中Hemocytin的蛋白水平检测
    3.3 结论与讨论
第四章 家蚕Hemocytin与 N.bombycis的相互作用分析
    4.1 材料与方法
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 主要试剂名称与配方
        4.1.3 实验仪器
        4.1.4 实验方法
    4.2 结果与分析
        4.2.1 Hemocytin在天然状态下对N.bombycis粘附和凝集作用分析
        4.2.2 Hemocytin重组蛋白对N.bombycis粘附和凝集作用分析
        4.2.3 非标记定量蛋白质组学寻找差异蛋白
        4.2.4 酵母双杂交实验鉴定Hemocytin与 SWP25 的互作关系
    4.3 结论与讨论
第五章 Hemocytin在启动家蚕细胞免疫中的作用分析
    5.1 材料与方法
        5.1.1 实验材料
        5.1.2 主要试剂名称与配方
        5.1.3 实验仪器
        5.1.4 实验方法
    5.2 结果与分析
        5.2.1 Hemocytin促进家蚕血细胞凝集与黑化作用分析
        5.2.2 Hemocytin促进血细胞对N.bombycis的包囊与黑化实验分析
        5.2.3 RNA干扰Hemocytin对N.bombycis增殖的影响
        5.2.4 过表达Hemocytin对 N.bombycis增殖的影响
    5.3 结论与讨论
第六章 全文总结与展望
    6.1 N.bombycis感染前后血淋巴中Hemocytin的转录和表达水平上调
    6.2 家蚕Hemocytin与 N.bombycis的相互作用分析
    6.3 Hemocytin在启动家蚕细胞免疫中的作用分析
参考文献
在读期间发表的文章及参研课题
附录
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]昆虫免疫系统中IMD信号通路的研究进展[J]. 杨静,马玉堃,付海燕,刘春光,杨峰山.  中国农学通报. 2019(24)
[2]昆虫抗菌肽分类及在医学中应用[J]. 王龙,冯群,高嘉敏,孙丽娜,余运运,夏嫱.  环境昆虫学报. 2017(06)
[3]家蚕微粒子病防控技术研究的发展现状与趋势[J]. 鲁兴萌,邵勇奇.  蚕业科学. 2016(06)
[4]家蚕微粒子病检验技术综述[J]. 鲁兴萌,邵勇奇.  蚕业科学. 2016(04)
[5]血管性血友病因子与不同转移潜能人肺癌细胞转移的相关性研究[J]. 张立,李能莲,舍雅莉,王雅莉,骆亚莉,胡树名.  甘肃中医学院学报. 2013(03)
[6]昆虫免疫识别与病原物免疫逃避机理研究进展[J]. 宁媛媛,尤民生,王成树.  昆虫学报. 2009(05)
[7]浅谈家蚕微粒子病的发生与防治[J]. 王玉霞.  北方蚕业. 2006(03)
[8]鳞翅目昆虫内外凝集素的研究概况[J]. 蒋芸芸.  华东昆虫学报. 2006(01)
[9]家蚕微粒子病流行发生的历史和现状[J]. 刘吉平,徐兴耀.  中国蚕业. 2000(01)

博士论文
[1]海伦微孢子虫极管蛋白EhPTP4的鉴定及其在侵染宿主细胞过程中的作用研究[D]. 韩冰.西南大学 2017

硕士论文
[1]中国蜜蜂微孢子虫种质分布及侵染意蜂中肠的蛋白质组分析[D]. 张建燕.中国农业科学院 2015



本文编号：3184332