菰黑粉菌MAPK基因UeKpp2和UeKpp6的功能研究

发布时间：2024-06-30 13:12

　　菰黑粉菌(Ustilago esculenta)是一种独特的病原真菌,其侵染茭白植株(Zizania latifolia)后可抑制植株抽穗开花并刺激茎基部膨大形成茭白。在东亚及东南亚地区尤其是中国,茭白是一种营养很高的水生蔬菜,也是一种重要的药材。前期研究发现,菰黑粉菌是一种典型的二型态真菌,且与其他二型态真菌类似存在酵母型和菌丝型两种型态,而由酵母型向菌丝型转换是此类真菌致病性的关键。另外,促分裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)信号途径在病原真菌中广泛存在,其在菌株的二型态转换及致病性过程中起重要作用,目前该途径中对MAPK基因的研究相对较多。本研究利用菰黑粉菌基因组测序结果,结合玉米黑粉菌(Ustilago maydis)Kpp2和Kpp6的氨基酸序列,成功从菰黑粉菌中克隆并鉴定得到两个MAPK基因UeKpp2和UeKpp6。通过荧光定量PCR、基因修饰、融合及接种实验对UeKpp2和UeKpp6基因的表达模式和生物学功能进行了研究,并通过酵母双杂交实验对UeKpp2和UeKpp6可能参与的调控途径进行了探究。克隆得到菰黑...

【文章页数】：85 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.1玉米黑粉菌生活史[9]

米黑粉菌同属黑粉菌属，推测其生活史与玉米黑粉菌相似[9]（图1.1），近期，胡鹏[10]通过单孢分离法从正常茭和灰茭中分离得到两对性亲和的菰黑粉菌单倍体菌株（UeMT10和UeMT46，UeT14和UeT55），进一步构建了携带GFP的单倍体菌株，初步完善了菰黑粉菌的生活史。光学....

图1.3部分病原真菌Fus3/Kss1信号途径MAPK模块

稻瘟菌该途径的MAPK模块包括Mst11（MAPKKK）、Mst7（MAPKK）、Pmk1（MAPK）（图1.3），研究发现mst11、mst7突变菌株不能形成附着胞，且致病性丧失[77]。该模块上游的一些基因也被克隆，如mst50、ras1、ras2，其中mst50....

图2.1融合片段构建及缺失菌株筛选的原理

中国计量大学硕士学位论文2μL，内切酶22μL，质粒约10μg，加ddH2O至50μL。37产物进行1.0%的琼脂糖凝胶电泳检测，选择目的条带割胶除载体的构建菰黑粉菌基因组序列结合融合PCR的原理分别在UeKpp2阅读框上下游各1000bp左右处....

图2.2玉米发病程度的等级标准注：A-G分别代表Deadplants、Heavytumors、Normaltumors、Smalltumors、Ligulaswelling、Chlorosis、

中国计量大学硕士学位论文00大于1.0，然后分别取500μL上述的菌液至50mLYEPS液体培养180r/min培养至OD600为0.6-0.8，离心收集菌体，用水稀释至OD600为mL的一次性注射器吸适量稀释好的菌液分别接种30株种植7d的....

本文编号：3998782